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操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97418 |
商品属性：
名称 小梁网细胞 2.组织来源：眼球 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 人小梁网细胞分离自眼球组织；小梁网由角膜基质纤维、后界膜和角膜内皮向后扩展而成，覆盖在巩膜静脉窦的内侧。小梁网细胞在眼内压调节中起着关键作用；小梁网细胞内有特定的神经递质和神经肽受体，其中包括肾上腺素、乙酰和神经肽Y。青光眼是由于眼内压力升高而造成的一种不可逆致盲眼病，小梁网细胞的体外培养是青光眼病因学研究的重要手段之一。在小梁网细胞中，一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制，小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。形态学观察可见，刚从组织块长出的原代细胞，形态各异，多数呈星状或不规则形。细胞有胞突，核椭圆形，胞体肥大，胞浆丰富，且可见吞噬颗粒。随着细胞的增生及相互融合为单层，细胞的形态趋于一致。胞浆的色素颗粒及胞突消失，排列紧密呈类似上皮细胞的扁椭圆形或不规则形。胞体透亮，包膜清晰。 5.方法简介： ()实验室分离的人小梁网细胞采用组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的人小梁网细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H132 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态梭形、多角形 传代特性可传1-2代 消化液0.25% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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Rickettsia spp.立克次氏体通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周PANK2 泛酸激2抗体 规格: 0.2ml
Hanzalova Virus汉扎洛瓦病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Shigella tropina 志贺氏菌菌体蛋白抗体 规格: 1mlElongin B/TCEB2 转录延伸因子B2抗体 规格: 0.1ml
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