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商品属性：

细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

大鼠 APEX1 基因全长ORF克隆

大鼠 TRUB2 基因全长ORF克隆

大鼠 CYB5A 基因全长ORF克隆

大鼠 GPX2 基因全长ORF克隆

大鼠 NAT9 基因全长ORF克隆

大鼠 ATP5C1 基因全长ORF克隆

大鼠 TRAPPC5 基因全长ORF克隆

大鼠 PSMA7 基因全长ORF克隆

大鼠 RPL4 基因全长ORF克隆

大鼠 MFAP2 基因全长ORF克隆

CHL (仓鼠肺细胞)假单菌琼脂基础培养基/CN琼脂 CN Agar 250g

EG培养基 EG Medium 250g波尔顿选择性增菌肉汤进口、国产Bolton Selective Enrichment broth用于弯曲杆菌选择性增菌培养(Merck方法)250

2mL 氨基磁珠 Magnetic beads,Amino 4℃密闭、竖直保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Protein FAM214A

1瓶 OVCaR-3株 OVCaR-3 低温运输和保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Myc box-dependent-interacting protein 1

100mL 茜素红S染色试剂盒 Alizarin Red S Staining Kit 常温保存

2 ug pPRIME-TET-GFP-FF3 pPRIME-TET-GFP-FF3 低温运输，-20℃保存PLET 琼脂基础进口、国产PLET Agar Base用于炭疽杆菌的分离鉴别250

100mL Biotin Solution（溶液）,0.02% Biotin Solution,0.02% 常温保存 0.312-20 ng/mL 人线粒体天冬谷载体同工型1(AGC1/SLC25A12)ELISA试剂盒

2 ug pACYC 184 pACYC 184 低温运输，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人蛋白1调节亚基14B (PPP1R14B)ELISA试剂盒

24 T 乳酸脱氢测试盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存匹克氏肉汤基础B进口、国产Pick，s Broth Base B250克一次性使用卫生用品中溶血性链球菌的检验

MUG培养基 MUG Medium 100g显色培养基进口、国产Staphylococcus Chromogenic Medium用于菌的显色培养1000ml

100g 三 ( 羟甲基 ) 氨基甲烷 TRIS(Tris（Hydroxymethyl）Aminomethane) 室温干燥保存 0.312-20 ng/mL 人粒趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。