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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96742 |
商品属性:
名称 RK1 (大鼠肾细胞) 生长特性贴壁细胞 细胞形态成纤维细胞样 背景描述RK1细胞系来源于一大鼠的肾组织,2007年由中国科学院昆明细胞库建立。 生长培养基RPMI-1640+15% FBS+1% P/S 推荐传代比例1:2-1:3 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠 Cadherin-8 / CDH8 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
狗 Ephrin-A5 / EFNA5 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
狗 ALK1 / ACVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 TIM3 / HAVCR2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 Contactin 1 / CNTN1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 TSPAN8 / Tetraspanin
RK1 (大鼠肾细胞)四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB肉汤) TTB Broth 10ml*20支/包 0.312-20 ng/mL 鲤春病毒(SVCV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
2 ug pPRIME-TREX-GFP-FF3 pPRIME-TREX-GFP-FF3 低温运输,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人胆汁酸受体(Bile acid receptor)ELISA试剂盒
50T 流行性出血热汉坦病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Potassium voltage-gated channel subfamily B member 2
10g L- 苯 L-Phenylalanine 室温干燥避光保存
C.L.E.D培养基添加剂 C.L.E.D Medium Supplement 1ml*5支 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Synaptosomal-associated protein 25
缓冲动力-硝酸盐培养基 Buffered Power - nitrate medium 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Decorin
普通琼脂 Nutrient Agar 250g 0.156-10 ng/mL 人线粒体肌脱氢(SarDH)ELISA试剂盒
10mL 亚氨二乙酸介质 IDA(Iminodiacetic Acid)Resin 常温保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Transmembrane 4 L6 family member 20
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 常温保存
变形杆菌成套生化鉴定管(BXWS) BXWS 13种*1套/盒*10盒T1N3肉汤进口、国产T1N3 Broth250克霍乱弧菌的生长试验
50次 植物叶绿体蛋白提取试剂盒 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2/B1