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操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96490 |
商品属性：
名称 NIH/3T3 (小鼠胚胎细胞) 别称NIH/3T3; NIH-3T3; NIH3T3; 3T3; 3T3NIH; 3T3-Swiss; Swiss-3T3; Swiss/3T3; Swiss 3T3; Swiss3T3 种属小鼠 年龄（性别）胚胎 组织来源胚胎 生长特性贴壁细胞 细胞形态成纤维细胞样 背景描述NIH/3T3细胞是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触性抑制的连续传代细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株，建立的NIH/3T3细胞株又进行了5轮以上亚克隆。NIH/3T3细胞对肉瘤病毒的转化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，对DNA转化及转染研究十分有用；NIH/3T3细胞鼠痘病毒阴性。 生物安全等级1 生长培养基DMEM＋10% CS＋1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~20小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人 TGFBR1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 E-Cadherin 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签
人 EREG 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
人 TGFA 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
小鼠 CD16-2 / FCGFR4 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 MS4A1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签
人 PRICKLE2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签
人 PMP22 基因
NIH/3T3 (小鼠胚胎细胞)50mL EGTA Solution（EGTA溶液）,1M,pH8.0 EGTA Solution,1M,pH8.0 常温保存大肠杆菌显色培养基配套平皿进口、国产E.Coli Chromogenic Medium Dish9㎝/块
Tergitol-7琼脂 Tergitol-7 Agar 250g 7.8-500 pg/mL 人降钙素(CT)ELISA试剂盒
250mg Rifampicin -20℃保存
卵黄培养基基础 Egg-Yolk Mannitol Salt agar Base 250g
50T 犬瘟热病毒PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Sclerostin
10mL 石蜡油，PCR级 Paraffin，PCR Grade 常温 78-5000 pg/mL 人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒
2 ug pHelper pHelper 低温运输，-20℃保存
1瓶 EJ株 EJ 低温运输和保存 0.312-20 ng/mL 人早老素增强蛋白2 ELISA试剂盒
1瓶 Sp2/0-Ag14株 Sp2/0-Ag14 低温运输和保存 0.78-50 ng/mL 人γ转移1(GGT1)ELISA试剂盒
2 ug pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 低温运输，-20℃保存3.5% NaC1葡萄糖盐胨水发酵管进口、国产3.5% NaC1葡萄糖盐胨水发酵管20支BR
1瓶 Raji株 Raji 低温运输和保存 78-5000 pg/mL 人抑制素A(INH-A)ELISA试剂盒
