细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

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商品属性：

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

大鼠 S100A16 基因全长ORF克隆

大鼠 ARHGDIB 基因全长ORF克隆

大鼠 MRAP 基因全长ORF克隆

大鼠 SMIM14 基因全长ORF克隆

大鼠 LOC171573 基因全长ORF克隆

大鼠 TNFAIP8L1 基因全长ORF克隆

大鼠 RPS6 基因全长ORF克隆

大鼠 CLPS 基因全长ORF克隆

大鼠 TTR 基因全长ORF克隆

大鼠 TPPP3 基因全长ORF克隆

CHO-K1 (仓鼠卵巢细胞亚株)月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） Lauryl Sulfate Tryptose Broth 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Alpha-N-acetylglucosaminidase

50次 DNA电泳分子量标准(pBR322/MspI) DNAMETER（3） 4℃保存

2 ug pOTB7 NCF2 pOTB7 NCF2 低温运输，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL A组轮状病毒(HRV-A)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

10块 LB平板培养基（LB-Tet平板） LB Petri Dish 低温 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Neurosecretory protein VGF

5次 一站式大提柱式miRNAout Maxi Column miRNAOUT 4℃保存

1瓶 MuM-2C株 MuM-2C 低温运输和保存 78-5000 pg/mL 出血性大肠杆菌(EHEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

BETA-SSA琼脂 BETA-SSA Agar 250g 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 15

200U Dicer（RNase III） Dicer（RNase III） -20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human NMDA receptor-regulated protein 2

50次 柱式植物RNA-DNA双提试剂盒   31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Ubiquitin-like protein ISG15

250mL Succinate Buffer（琥珀酸缓冲液）,0.2M,pH5.5   Succinate Buffer,0.2M,pH5.5   常温保存 15.6-1000 ng/mL ELISA Kit for Human Antithrombin-III

2 ug pOG2-cre pOG2-cre 低温运输，-20℃保存双洗琼脂平板进口、国产双洗琼脂平板10块