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商品属性：

细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

293T [HEK-293T](人胚肾细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

3T3-L1 (小鼠胚胎成纤维细胞)    1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

4T1 (小鼠乳腺癌细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

6T-CEM (人T细胞白血病细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

769-P (人肾细胞腺癌细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

786-O [786-0] (人肾透明细胞腺癌细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

95-D [PLA-801D] (人高转移肺癌细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

A172 (人胶质母细胞瘤细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

A2780 (人卵巢癌细胞)    1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

A-375 (人恶性黑色素瘤细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

A-431 (人表皮癌细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

A549 [A-549] (人非小细胞肺癌细胞)     1×10⁶cells/T25培养瓶    细胞系    

Mouse thyrotropin-releasing hormone ELISA KIT    96T/48T    小鼠促甲状腺素释放激素(TRH)    

Mouse CRH ELISA Kit    96T/48T    小鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)     

Mouse Insulin Receptor β（ISR-β）ELISA KIT    96T/48T    小鼠胰岛素受体β（ISR-β）    

Mouse HbA1c ELISA Kit    96T/48T    小鼠糖化血红蛋白（HbA1c）    

Mouse lymphocyte function associated antigen-3 ELISA Kit    96T/48T    小鼠LFA-3(CD58)    

Mouse HLA-2 ELISA Kit    96T/48T    小鼠组织相容性抗原（HLA-2）    

Mouse HLA-1 ELISA Kit    96T/48T    小鼠组织相容性抗原（HLA-1）    

Mouse Bone morphogenetic protein 7 ELISA Kit    96T/48T    小鼠骨成型蛋白质7（BMP-7）    

Mouse HA ELISA Kit    96T/48T    小鼠透明质酸(HA)    

Mouse 25(OH)D3 ELISA Kit    96T/48T    小鼠25羟基（25(OH)D3）    

Mouse Myoglobin ELISA Kit    96T/48T    小鼠肌红蛋白(MYO)    

Mouse Thromboxane B2 ELISA Kit    96T/48T    小鼠血栓素（TXB2）    

Mouse acetylcholine ELISA Kit    96T/48T    小鼠乙酰(ACh)    

Mouse Tissue Polypeptide Antigen ELISA Kit    96T/48T    小鼠组织多肽抗原（TPA）    

Mouse t-PA ELISA Kit    96T/48T    小鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)     

5637 (人膀胱癌细胞)Mouse β-Thromboglobulin ELISA Kit    96T/48T    小鼠β血小板球蛋白(β-TG)    

Mouse dihy－drotestosterone ELISA Kit    96T/48T    小鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒    

Mouse SPE(IgG,M) ELISA Kit    96T/48T    小鼠抗体(SPE)    

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。