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细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97010 |
商品属性：
名称 鸡肺动脉平滑肌细胞 2.组织来源：肺动脉组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 鸡肺动脉成纤维细胞分离自肺动脉组织；肺动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺大动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上、下叶。右肺动脉较长而粗，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺动脉成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺动脉成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺动脉的正常形态；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。 5.方法简介： ()实验室分离的鸡肺动脉平滑肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的鸡肺动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-C004 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传5代左右；3代以内状态最佳 消化液0.25% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
重组狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 标签)
重组狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 标签)
重组狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签)
重组人 EGFL6 / EGF-L6 蛋白 (His 标签)
重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白
重组人 BTC / Betacellulin 蛋白
重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白
重组食蟹猴 BTC / Betacellu
鸡肺动脉平滑肌细胞Herpesvirus Saimiri(HVS)松鼠猴疱疹病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周GDF10 生分化因子10抗体（TGF-β超家族10） 规格: 0.1ml
Loboa lobai罗布罗布芽生探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy7 Cy7标记的兔抗豚鼠IgM 规格: 0.1ml
Elm phloem necrosis phytoplasma榆韧皮部坏死植原体PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CCL4/MIP-1 Beta 巨噬细胞性蛋白1β抗体 规格: 0.1ml
Radix cynanchi atrati白薇PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周C20orf103 20号染色体开放阅读框103抗体 规格: 0.2ml
Fowl Pox Virus(FPV)禽痘病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-Bad(Ser112) 磷酸化相关死亡促进因子抗体 规格: 0.1ml
Edwardsiella tarda迟钝爱德华探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周UNC93B 内质网膜蛋白UNC93B抗体 规格: 0.2ml
Rhizoma coptidis黄连染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周MFAP3L 微丝相关蛋白3样抗体 规格: 0.1ml
Human Papillomavirus 12(HPV-12)人瘤病毒12 LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TASK 3/KCNK9 酸敏性钾离子通道蛋白抗体 0.2ml
Poliovirus 3 (PV-3)脊髓灰质炎病毒3型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-Crkl(Tyr244) 磷酸化接蛋白CrkL抗体 规格: 0.1ml
Fructus bruceae鸦胆子PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周VGLUT1/BNP1 脑特异性钠依赖无机磷转运蛋白抗体 规格: 0.2ml
