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细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97088 |
商品属性：
名称 兔膀胱平滑肌细胞 2.组织来源：膀胱组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 兔膀胱平滑肌细胞分离自膀胱组织；膀胱是主要由平滑肌细胞组成的中空器官，膀胱平滑肌的舒张和收缩使得膀胱分别储存和排出尿液。膀胱平滑肌细胞表型的调控和可诱导一氧化氮合酶的表达与多种病理状况有关，包括膀胱功能障碍。研究表明，组织缺氧抑制膀胱平滑肌细胞的增殖，膀胱平滑肌细胞的分化依赖于膀胱上皮细胞释放的因子。膀胱平滑肌细胞外基质的分泌表型可通过细胞所经历的机械变形频率而改变。平滑肌是许多疾病中的共同路径，因此，了解在疾病发生及持续过程中平滑肌怎样变化，这是治疗方法取得进展的重要一步。膀胱壁由三层组织组成，由内而外为黏膜层、肌层和外膜。其中，肌层主要由平滑肌构成。膀胱平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。体外培养膀胱平滑肌细胞不仅为组织工程膀胱、尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基础与前提。 5.方法简介： ()实验室分离的兔膀胱平滑肌细胞采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的兔膀胱平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-Rb020 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传5代左右；3代以内状态最佳 消化液0.25% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
5%乳糖发酵管 英文名称： 产品规格：20支
小鼠胰岛素自身抗体(IAA)免疫试剂盒*直销
小鼠基质金属蛋白5(MMP-5)免疫试剂盒*直销
豚鼠内皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫试剂盒进口、组装
人腺病毒IgM(ADV-IgM)免疫试剂盒进口、分装
人Ⅱ(FⅡ)免疫试剂盒进口、分装
人抗风疹病毒IgG抗体(anti-RV IgG)免疫试剂盒进口、分装
人多药耐药相关蛋白(MRP)免疫试剂盒进口、分装
犬红细胞生成素(EPO)免疫试剂盒进口、组装
马结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)免疫试剂盒进口
兔膀胱平滑肌细胞Madurella spp.马杜拉分枝探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Menin/Men1 Menin抑蛋白抗体 规格: 0.2mlSDHA 琥珀酸脱复合体亚基A抗体 规格: 0.2ml
Rickettsia prowazekii普氏立克次氏体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Bio 标记的兔抗豚鼠IgM 规格: 0.3mlPRSS3 脑胰蛋白3抗体 规格: 0.2ml
Matrii sulfas exsiccatus玄明粉染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Cathepsin Z 组织蛋白z抗体 规格: 0.1mlEntactin/Nidogen 巢蛋白1抗体 规格: 0.2ml
Itaituba Virus伊塔图巴病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周C19orf18 19号染色体开放阅读框18抗体 规格: 0.2mlPP2Ac/PP4C 磷酸酯-2Ac抗体 规格: 0.1ml
Duck Plague Virus(DPV)鸭瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TGF Beta R3 转移生因子β受体3抗体（TGF-βRⅢ） 规格: 0.1mlPLEKHM3 小板白细胞C激底物同源结构域M3抗体 规格: 0.2ml
Exocarpium benincasae冬瓜皮LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周C-Met/Met/HGFR 肝细胞生因子受体抗体 规格: 0.1ml
Eikenella corrodens啮蚀艾肯LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgM/Bio 标记的兔抗鸡IgM 规格: 0.1ml
Equine Rotavirus马轮状病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ERG25 甲基固醇羟化单加氧1抗体 0.2ml
Ash yellows phytoplasma白蜡树黄化植原体PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PDGFC/VEGF E 小板源性生因子C抗体 规格: 0.2ml
Eperythrozoon ovis绵羊附红 体（绵羊嗜血支原体）染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-3周PCDHB3 原钙粘蛋白β3抗体 规格: 0.2ml
