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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97384 |
商品属性:
名称 大鼠晶状体上皮细胞 2.组织来源:晶状体组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠晶状体上皮细胞分离自晶状体组织;晶状体源自胚胎发育外胚层,仅含有上皮细胞及其产物,晶状体囊膜作为屏障将晶状体与其它类型细胞*分开;因而,晶状体上皮细胞培养既无神经和血管组织的干扰,又不受其它类型细胞如成纤维细胞的污染,保证了培养中细胞成分的单一性。晶状体上皮细胞主要负责调节晶状体的生理平衡,包括电解质和液体的输送。在正常的发育过程中,晶状体上皮细胞分化和成熟,然后迁移到晶状体内部,产生晶体蛋白,自身也拉长而变成晶状体纤维细胞,并最终失去细胞核和其它的细胞器。研究表明,晶状体上皮细胞的分化和极化受到了眼部液体中的生长因子的调控,包括表皮生长因子和胰岛素等。细胞贴壁后为扁平不规则多角形,呈单层生长、连成膜状。晶状体上皮细胞是紧密贴附于晶状体前囊内表面的单层上皮细胞,其异常增殖和分化与白内障和后囊混浊的发生密切相关,体外培养是研究其生长规律的主要手段。 5.方法简介: ()实验室分离的大鼠晶状体上皮细胞采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的大鼠晶状体上皮细胞经BFSP2(晶状体蛋白)免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R119 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态上皮细胞样 传代特性可传1-2代 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人解脲脲原体抗体(UU-Ab)免疫试剂盒现货供应
350ml厌氧培养袋 英文名称: 产品规格:10个/包
布氏肉汤添加剂 英文名称:Brucella Broth Additive 产品规格:2ml*5
猪趋化因子配体28(CCL28)免疫试剂盒进口、分装
小鼠丝裂原激活的蛋白激/MAP激(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)免疫试剂盒现货供应
小鼠程序性死亡1(PD-1)免疫试剂盒现货供应
兔子Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)免疫试剂盒进口、组装
人难辨梭状芽孢杆菌毒素A(TOXA)免疫试剂盒进口、组装
大鼠晶状体上皮细胞Mycoplasma haemocanis犬血支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周IGFBP2 胰岛素样生因子结合蛋白2抗体 规格: 0.1ml
Entamoeba histolytica溶组织内阿米巴染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-IRAK1 (Thr209) 磷酸化白介素-1受体相关激1抗体 规格: 0.1ml
Sabia Virus(SABV)萨比亚病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CTNNBIP1 β链接素相互作用蛋白1抗体 规格: 0.1ml
Candida auris耳念珠探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-3周ACVRL1/ALK1 激活素受体样激1抗体 规格: 0.2ml
Dermatobia hominis人肤蝇探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周EEF2 真核翻译延因子2抗体 规格: 0.2ml
Rhizoma dioscoreae hypoglaucae粉萆薢染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽脑脊髓毒AEV抗体 0.1ml
Capillaria obsignata封闭毛细线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-BRCA1(Ser1423) 磷酸化易基因1抗体 规格: 0.1ml
Ehrlichia chaffeensis查菲艾利希体(查菲埃立克体)探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy7 Cy7标记的兔抗牛IgM 规格: 0.1ml
Radix linderae探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周phospho-STAT5a(Tyr694) 磷酸化信号转导和转录激活因子5a抗体 规格: 0.1ml
White Sturgeon Iridovirus(WSIV)高首鲟虹彩病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CXorf56 X染色体开放阅读框56抗体 规格: 0.2ml