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英文名称:BML-277
产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg
货号:FS-X10963
产品介绍:
BML-277是一种选择性的检测点激酶2(Chk2)抑制剂,IC50为15nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:516480-79-8 别名:Chk2 Inhibitor II;C 3742 纯度:97.14% 分子量:363.8 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
枯草芽孢杆菌人甲状腺结合球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工MM(GP-MM)
球毛壳菌人晚期糖基化终末产物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
巨兽芽孢杆菌人C多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
点柄粘盖牛肝菌人晚期糖基化终末产物受体Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲状腺抗体(TAb)
毕赤酵母人胰高血糖Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲状腺抗体(TAb)
弗雷德里克斯堡假单胞菌人胰多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲状腺受体抗体(TRAb)
大肠埃希菌人胰岛自身抗体Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲状腺受体抗体(TRAb)
壳蕉孢菌人谷脱羧Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠儿茶(CA)
杂色尾孢人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠儿茶(CA)
类动胶杜擀氏菌属人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)
休哈塔假丝酵母休哈塔亚种人未磷化类胰岛生长因子结合蛋白-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)
大豆慢生根瘤菌人甲状旁腺激样蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)
解杆菌人内脂/内脏脂肪Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)
柑橘炭疽盘孢菌人apelin 12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌营养1(CT-1)
大肠埃希菌人葡萄糖依赖性胰岛释放多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌营养1(CT-1)
喜盐芽孢杆菌人胰岛原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)
尾部结构蛋白抗体万寿菊链格孢家兔皮肤细胞
8-羟基鸟DNA糖基化向日葵链格孢大额牛肺细胞
µ-型阿片受体抗体丝轴黑粉菌树鼩肾上皮样细胞
胚胎干细胞关键蛋白2抗体角鳞灰鹅膏菌小菊头蝠肺成纤维样细胞
激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)耐寒短杆 毛栲利△1-吡咯啉-5-羧合成
香菇 3,4-二羟基肉桂乙酯谷氨酰合成
黄杆 DL-甲状腺肿谷脱氢
酿酒酵母 二氢7-羟基-3-(4-羟苯基)-4-苯并吡喃酮琥珀-Q还原
大豆慢生根瘤 色C氧化还原
Botryosphaeria parva 盐帕洛诺琼色C还原
酿酒酵母 7-羟基黄酮琥珀-Q还原
栖植物潘隆尼亚碱湖杆 S-(5'-腺基)-L-化蛋色C氧化还原
法布里德巴利酵母 8-姜色C还原
产氨棒杆 紫草NADH脱氢
根瘤 β-桉叶ATP合成
粘着剑* 3,4,5-氧基苯乙烯游离睾酮
球孢白僵 羊毛甾游离雌二
核盘 木兰花碱(化物)α2巨球蛋白
平脐蠕孢 甲磺雷沙吉兰造血器官坏死病抗体