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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Epigenetic Reader Domain抑制剂
英文名称：EPZ005687
产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
货号：FS-X10790
产品介绍:
EPZ005687是一种有效的，选择性的Epigenetic Reader Domain抑制剂，Ki值为24nM，对其选择性是对EZH1的50倍，对其他15种甲基转移酶的500倍。 注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！ 号：1396772-26-1 纯度：98.97% 分子量：539.67 储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
猪链球菌分型血清参考品 血清型 SS19EB 病 IgG(间接法二步法)Anti-MDM2 Antibody人降钙基因相关肽(CGRP)
孟氏假单胞菌EB 病 IgM(间接法二步法)Anti-MDM4 Antibody人降钙基因相关肽(CGRP)
Leucobacter kyeonggiensis肺炎支原体 IgG(间接法二步法)Anti-MECP2 Antibody人生长抑(SS)
Nocardioides simplex肺炎支原体 IgM(间接法二步法)Anti-ME1 Antibody人生长抑(SS)
球孢枝孢流感病A IgG(间接法二步法) Anti-ME3 Antibody人生长激释放多肽(GHRP)
平菇流感病A IgM(间接法二步法)Anti-MED1 Antibody人生长激释放多肽(GHRP)
萎蔫短小杆菌付流感病 IgG(间接法二步法)Anti-MED13L Antibody人抑制B(INH-B)
盖替隐球酵母付流感病 IgM(间接法二步法)Anti-MED14 Antibody人抑制B(INH-B)
空泡单胞菌流行性出血热病 IgG(间接法二步法)Anti-MED13 Antibody人促甲状腺释放激(TRH)
环形凸脐蠕孢流行性出血热病 IgM(间接法二步法)Anti-MECP2 Antibody人促甲状腺释放激(TRH)
枯草芽孢杆菌流行性腮腺炎病 IgG(间接法二步法)Anti-MED18 Antibody人雌激(E)
葡萄座腔菌流行性腮腺炎病 IgM(间接法二步法)Anti-MED21 Antibody人雌激(E)
无二柠檬杆菌乙型脑炎病 IgG(间接法二步法)Anti-MED24 Antibody人褪黑(MT)
传染性支气管炎病乙型脑炎病 IgM(间接法二步法)Anti-MED23 Antibody人褪黑(MT)
不动杆菌人绒毛膜促性腺激(夹心法一/二步法)Anti-MED23 Antibody人6前列腺(6-K-PG)
玫瑰考克氏菌鱼类白介1βAnti-MEF2B Antibody人6前列腺(6-K-PG)
Rab蛋白GTP激活蛋白1抗体烬灰链霉菌人伯基特淋巴瘤细胞
c-Myc应答蛋白抗体产色链霉菌人胎盘绒膜癌细胞
环指蛋白157抗体白色链霉菌人涎腺癌细胞
G蛋白相关RABX5抗体大团囊虫草615小鼠网织细胞性白血病瘤株
Epigenetic Reader Domain抑制剂短芽孢杆 2-噻吩-5-甲成纤维生长因子21
亮白曲霉 胰胨-亚硫盐-环丝琼脂基础瘟热病
弗氏柠檬杆 溴化十六烷基琼脂（USP）瘟病抗原
黄微绿链霉 脑心浸出液肉汤（BHI）GB标准病性出血症
香菇17 乙(1R,2S)-2-[N-苄基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反应用试剂]瘟病抗体
酱油曲霉 大豆酪蛋白消化物培养基病性出血症抗体
葡萄座腔 营养琼脂(水质监测)抗3
禽白血病病 大豆酪蛋白消化物培养基胰岛生长因子1
枯草芽孢杆 胰蛋白胨大豆琼脂禽呼肠孤病抗体
柔嫩艾美耳球虫 乙(1S,2R)-2-[N-苄基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反应用试剂]β-羟丁
中国台湾根霉 孟加拉红培养基酮
亚灰光柄菇 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）乙酰乙
炭疽病 胰胨琼脂培养基血红蛋白
链格孢 2,6-二吡啶白介1α
多色节杆 MC培养基（不含琼脂）低密度脂蛋白
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
