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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：ALK5抑制剂(GW788388)
英文名称：GW788388
产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
货号：FS-X10789
产品介绍:
GW788388是一种有效的ALK5抑制剂，IC50值18nM；同时抑制TGF-β II型受体和激活素II型受体的活性，但对BMP II型受体无作用。 注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！ 号：452342-67-5 纯度：99.64% 分子量：425.48 储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
粉红单端孢霉艾柯病 IgM(间接法二步法)Anti-MAVS Antibody人儿茶(CA)
大肠埃希氏菌轮状病 IgG(间接法二步法)Anti-MAZ Antibody人儿茶(CA)
膜醭毕赤酵母轮状病 IgM(间接法二步法)Anti-MBTPS1 Antibody人半胱蛋白抑制剂/胱抑C(Cys-C)
嗜盐沉积物杆菌腺病 IgG Ⅲ型(间接法二步法)Anti-MBD1 Antibody人半胱蛋白抑制剂/胱抑C(Cys-C)
雷氏普罗威登斯菌腺病 IgM Ⅲ型(间接法二步法)Anti-MBD3 Antibody人乙酰受体抗体(AChRab)
镶边链霉菌腺病 IgG Ⅶ型(间接法二步法)Anti-MBL2 Antibody人乙酰受体抗体(AChRab)
灰橙链霉菌腺病 IgM Ⅶ型(间接法二步法)Anti-MBTPS2 Antibody人5羟色(5-HT)
樟疫霉腺病 IgM Ⅺ型(间接法二步法)Anti-MBTPS2 Antibody人5羟色(5-HT)
球色单隔孢属大鼠褪黑Anti-MC5R Antibody人抑制A(INH-A)
铜绿假单胞菌兔结合珠蛋白/触珠蛋白Anti-MC1R Antibody人抑制A(INH-A)
黑曲霉小鼠癌胚抗原Anti-MCHR2 Antibody人性激结合球蛋白(SHBG)
灰黄链霉菌苏州亚种人ω干扰Anti-MCM3AP Antibody人性激结合球蛋白(SHBG)
楚氏喜盐芽孢杆菌腺病 IgG Ⅺ型(间接法二步法)Anti-MCPH1 Antibody人脱氢表雄S7(DHEA-S7)
聚贪噬菌鱼类白介1αAnti-MCPH1 Antibody人脱氢表雄S7(DHEA-S7)
裂孔平伏菌腺病 IgG 混合型(间接法二步法)Anti-MDM1 Antibody人脱氢表雄(DHEA)
粘膜鞘单胞菌腺病 IgM 混合型(间接法二步法)Anti-MDFI Antibody人脱氢表雄(DHEA)
肌相关蛋白1抗体球孢链霉菌人源胰腺癌细胞
RAS癌基因家族蛋白RAB40A抗体青色链霉菌人乳腺癌高转移细胞亚系
RAS癌基因家族蛋白RAB40C抗体红霉链霉菌人肺腺癌放后复发转移细胞
类风湿因子抗体灭蚊链霉菌瘤牛皮肤细胞
ALK5抑制剂(GW788388)地衣芽孢杆 三(2-噻吩基)膦胱抑
球孢白僵 煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB（含小倒管）骨蛋白
柠檬色节杆 煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB（含小倒管）轮状病抗体
滑假丝酵母 EC肉汤（含小倒管）仙台病抗体
酿酒酵母 N-(2-氨乙基)甘印度猬因子
纳什维尔链霉 LST-MUG信号3A
杂色曲霉 LST发酵管（含小倒管）圆环病2型
耐寒短杆 三糖铁管蛋白聚糖
羊肚 改良EC（mEC+n）肉汤白介5
绿色木霉 2-叔丁基对甲I型胶原蛋白
牛丝膜 改良EC（mEC+n）肉汤总胶原
辣椒溶杆 磷盐缓冲液（PBSpH7.2）白介21
链格孢 营养琼脂(水质监测)白介20
溜曲霉 异硫基乙乙酯白介22
*灰葡萄孢 D-环丝溶液AKT蛋白
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
