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【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称 | 规格 | 检测方法 | 货号 |
100管/48样 | 微量法 | GOY-01S6349 |
商品介绍
测定意义 辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。 测定原理 分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。 所需的仪器和用品 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行
匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10
4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于 1,建议将试剂二用蒸馏水稀释 7 倍后使用(10μL 试剂二原液+60μL蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?对照管的范围是 0.4-1。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;
(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间 30min可以延长到 40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般
将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10倍后再测,通常可以使测定正常。
Rhizobium sp.低氧诱导因子-1检测试剂盒
Azospirillum sp.低氧诱导因子-1α检测试剂盒
Rhizobium sp.抵抗素检测试剂盒
Azospirillum sp.抵抗素样α检测试剂盒
Rhizobium sp.淀粉检测试剂盒
Rhizobium sp.淀粉样前体蛋白检测试剂盒
Corynebacterium ammoniagenes凋亡相关因子检测试剂盒
Corynebacterium ammoniagenes丁酰酯检测试剂盒
辅酶ⅡNADP(H)含量微量法检测试剂盒正辛 AR,99%化肌球蛋白抗体CLNS1A/pICln 离子通道调节蛋白1A抗体
1,2- AR,99%化肝生长因子受体(原癌因)抗体CLN6 神经蜡样质脂褐质沉积病蛋白CLN6抗体
红铝溶液 70 wt%溶液丝裂原活化蛋白激MKK6抗体CLN3 神经蜡样质脂褐质沉积病蛋白CLN3抗体
氢化钠 98%化丝裂原活化蛋白激MKK3/6抗体CLLD8/SETDB2 组蛋白H3-K9转移抗体
三乙烯四 Standard for GC化丝裂原活化蛋白激MKK6抗体CLLD7 核苷交换因子CLLD7抗体
三乙烯四 CP,68%嗜粒趋化蛋白22抗体CLLD6/C13orf1 慢性淋巴白血病缺失因6蛋白抗体
三乙烯四 AR,70%硫氨脑啡肽抗体CLK3 分裂周期样激3抗体
三乙烯四 色谱固定液抗体CLK2 分裂周期样激2抗体
三异 95%质金属蛋白9抗体CLIP1/CLIP170 质连接蛋白1抗体
3,5,5-己 97%原癌因M-ras抗体CLIC4 内离子通道蛋白4抗体
三羟烷 98%单核趋化蛋白1抗体Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) 盐克仑特罗/抗体
3,4,5,6-四氢酐 98%抗体CLECSF9/CLEC 4E C型凝集素4家族E抗体
己二 98%鸡支原体抗体CLEC5A/MDL1 C型凝集素结构域家族5成员A抗体
三硅烷 98%线粒体转录因子1抗体CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗体
六亚二异酯 97%有丝分裂抑制缺陷蛋白1抗体CLEC2/CLEC1B C型凝集素结构域家族1成员B抗体
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。