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【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称 | 规格 | 检测方法 | 货号 |
辅酶ⅠNAD(H)含量微量法检测试剂盒 | 100管/48样 | 微量法 | GOY-01S6321 |
商品介绍
测定意义 辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。 测定原理 分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。 需自备的仪器和用品 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行
匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10
4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于 1,建议将试剂二用蒸馏水稀释 7 倍后使用(10μL 试剂二原液+60μL蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?对照管的范围是 0.4-1。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;
(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间 30min可以延长到 40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般
将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10倍后再测,通常可以使测定正常。
骨成型蛋白4(BMP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
骨成型蛋白4(BMP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
骨成型蛋白4(BMP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII) 48T/96T Homo sapiens (Human)
骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
上皮性钙黏附蛋白(CDHE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 48T/96T Homo sapiens (Human)
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二级淋巴组织趋化因子(SLC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Secondary Lymphoid Tissue Chemokine (SLC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
趋化因子C-基元受体1(XCR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Chemokine C-Motif Receptor 1 (XCR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra) 48T/96T Homo sapiens (Human)
唾液酸结合Ig样凝集素3(SIGLEC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3 (SIGLEC3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
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睫状神经营养因子(CNTF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
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血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Chicken (Gallus)
α2-纤溶酶抑制因子(α2PI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
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NADP苹果酸脱氢酶(NADPMDH)测试盒 NADP苹果酸脱氢酶(NADPMDH)紫外分光光度法检测试剂盒
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线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶测试盒 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶紫外分光光度法检测试剂盒
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丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 丙酮酸脱羧酶(PDC)微量法检测试剂盒
丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 丙酮酸脱羧酶(PDC)紫外分光光度法检测试剂盒
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单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)紫外分光光度法检测试剂盒
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。