乳酸脱氢酶(LDH)可见分光光度法检测试剂
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2022-04-24 11:20:48
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产品简介

辅酶ⅠNAD(H)含量可见分光光度法检测试剂盒公司正在出售的产品:周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)ELISA Kit for Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 2A (CDKN2A)48T/96T周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)ELISA Kit for Cyclin

详细介绍

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商品属性:

产品名称

乳酸脱氢酶(LDH)可见分光光度法检测试剂盒

规格

50管/24样

检测方法

可见分光光度法

货号

GOY-01S6326

商品介绍:

测定意义

LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

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超细球形铜粉 99.9%,D50(0.2~0.55μm) Anti-P2Y4 receptor/P2ry4 /FITC  荧光素标记P2Y4受体抗体IgG鸡垂体腺苷环化激活肽27(PACAP-27)联免疫吸附测定试剂盒

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2-酰酯 98%Anti-P19ARF/FITC  荧光素标记p19ARF抑癌因抗体IgG绵羊S100钙结合蛋白B (S100B)联免疫吸附测定试剂盒

氨乙缩二 97%Anti-P21/WAF1/CIP1 /FITC  荧光素标记p21抗体IgG绵羊P选择素(SELP)联免疫吸附测定试剂盒

4-乙烯  98% Anti-P27/kip1 /FITC  荧光素标记P27抗体/周期素依赖激抑制剂IgG绵羊β内啡肽(β-EP)联免疫吸附测定试剂盒

纳米氮化铝 99.9% metals basis,50nmAnti-P27/kip1/Cy3  荧光素Cy3标记P27抗体/周期素依赖激抑制剂IgG绵羊白介素10(IL-10)联免疫吸附测定试剂盒

六方氮化 99.9% metals basis,1~2μmAnti-P38 MAPK/FITC  荧光素标记丝裂原活化蛋白激p38抗体IgG绵羊血清淀粉样蛋白A(SAA)联免疫吸附测定试剂盒

碳化 1-10 μm,98%Anti-P38 MAPK/RBITC  红色荧光素罗丹明(RBITC)标记丝裂原活化蛋白激p38抗体IgG绵羊化腺苷活化蛋白激(AMPK)联免疫吸附测定试剂盒

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

 


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