辅酶ⅡNADP(H)含量可见分光光度法

辅酶ⅡNADP(H)含量可见分光光度法

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2022-04-24 12:05:32
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产品简介

辅酶ⅡNADP(H)含量可见分光光度法检测试剂盒公司正在出售的产品:人状瘤病抗体(HPV) ELISA Kit,48T/96T
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详细介绍

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商品属性:

产品名称

辅酶ⅡNADP(H)含量可见分光光度法检测试剂盒

规格

50管/24样

检测方法

可见分光光度法

货号

GOY-01S6350

商品介绍:

测定意义

辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。

所需的仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

蕈碱型乙酰受体(抗原)Anti-ARMCX1 Antibody陈皮炭Chen Pitan

C-肽(C肽)Anti-ARL2BP Antibody人工虎骨Artificial?bones

钙结合蛋白(抗原)Anti-ARMCX2 Antibody白薇Bai Wei

腺苷受体A3抗原Anti-ARMCX3 Antibody全叶青兰All Ye Qinglan

巨噬来源的趋化因子αV多肽Anti-ARNT2 Antibody土鳖虫(冀地鳖)Woodlouse?(Hebei?Eupolyphaga sinensis)

化腺苷单活化蛋白激α1抗原Anti-ARPP21 Antibody紫草(新疆紫草)Gromwell?(Lithospermum?Xinjiang)

环腺苷酸应答元件结合蛋白(抗原)Anti-ARPP21 Antibody黄根Huang Gen

化环腺苷酸应答元件结合蛋白(多肽)Anti-ARRDC2 Antibody猴枣Hou Zao

辅酶ⅡNADP(H)含量可见分光光度法检测试剂盒氟化铬 AROAT-3(Organic anion transporter 3)  阴离子转运蛋白-3(抗原)猴嗜环蛋白/亲环素B(CYPB)联免疫吸附测定试剂盒  

氟化镁 AR,97.5% galectin 9   半糖凝集素9(抗原)猴白介素12 p40(IL-12 p40)联免疫吸附测定试剂盒

氟锌 CPOct-4  胚胎干关键蛋白(多肽)猴载脂蛋白A2(ApoA2)联免疫吸附测定试剂盒

氟化锌,无水 AR,99%OPN(osteopontin)  骨桥蛋白(抗原)猴β干扰素(IFN-β)联免疫吸附测定试剂盒

氟化锌,四水  98%P16/CDKN2A (Cyclin-dependent kinase inhibitor-2A)  抑癌因p16(抗原)猴DNA结合蛋白(DBP)联免疫吸附测定试剂盒

并咪唑 AR,98.5%p21/WAF1/CIP1   p21 核分裂抑制因子之一(抗原)猴核糖核T2(RNASET2)联免疫吸附测定试剂盒

2-巯吡-1-氧化钠盐 96%p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B)  p27(抗原)猴软骨寡聚质蛋白(COMP)联免疫吸附测定试剂盒  

2-巯吡-1-氧化钠盐 40%水溶液P63 protein  P63 肿瘤抑制因(抗原)猴绒毛蛋白(CVL/EZR)联免疫吸附测定试剂盒

角鲨烷 99%OPG(Osteoprotegerin)  护骨素(多肽抗原)猴破骨相关受体(OSCAR)联免疫吸附测定试剂盒

N-乙-2-氨吡咯烷  98%OPGL (Osteoprotegerin ligand)  骨保护蛋白配体(抗原)猴半凝集素14(GAL14)联免疫吸附测定试剂盒

1-(2-二氨乙)-1H-5-巯-四氮唑 98%P311 protein  增生性瘢痕相关蛋白(抗原)猴过氧化物体增殖物激活受体α(PPAR-α)联免疫吸附测定试剂盒

1-乙-2-吡咯烷酮 99%PARP(poly ADP-ribose polymerase)  多腺苷二多聚抗原猴T急性淋巴母白血病相关抗原(TALLA-1/CD231)联免疫吸附测定试剂盒

5-四唑 98%Visfatin-1 (PBEF1)(NT) Human  内脂素/内脏脂肪素(人:N端多肽)、内脏脂肪素、 又称:前B克隆增强因子、内肥素、腹脂素猴肠三叶肽因子3(TFF3)联免疫吸附测定试剂盒

2-氧-5-磺酰酯 98%Visfatin-1 (PBEF1)(NT) hu、 mo、 rat、MK  内脂素/内脏脂肪素(人、大、小鼠、猴同源:N端多肽)、内脏脂肪素、前B克隆增强因子、内肥素、腹脂素猴八聚体结合转录因子2(OBTF2)联免疫吸附测定试剂盒

叠氮钠 AR,99%(剧品)Visfatin-2(CT)hu、mo、rat、MK  内脂素/内脏脂肪素(抗人、大、小鼠、猴:N端多肽)前B克隆增强因子、内肥素、腹脂素猴纤维连接素相关抗原(FRA)联免疫吸附测定试剂盒  

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

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