海藻糖合成酶(TS)可见分光光度法检测试剂盒

海藻糖合成酶(TS)可见分光光度法检测试剂盒

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2022-04-27 13:08:27
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产品简介

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详细介绍

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商品属性:

产品名称

海藻糖合成酶(TS)可见分光光度法检测试剂盒

规格

50管/24样

检测方法

可见分光光度法

货号

GOY-01S6720

商品介绍:

测定意义

海藻糖是功能性低聚糖,具有非还原性、保湿性、热酸稳定性、抗冻结性等特性,是细胞在不良环境条件下产生的一种重要的抗逆应激物之一,它对生物大分子和生物体组织有着非特异性的保护作用。海藻糖合成酶(Trehalose Synthase)催化麦芽糖合成海藻糖,是海藻糖生物合成的关键途径之一。

测定原理:

TS催化麦芽糖产生海藻糖,使用糖化酶分解剩余麦芽糖为葡萄糖,通过葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,按照麦芽糖减少的量表示海藻糖合酶活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

5-基苯酞 97%亚钠 CP(剧品)Tenascin  固生蛋白抗原

2-氯烯 99%仲丁 99%TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor)  内涎蛋白/内皮唾液酸蛋白抗原

2--3-甲基吡 98%N,N-二甲基乙 99%TFF3 (trefoil factor3)  三叶肽因子3(多肽)

2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡盐酸盐  98%异佛尔酮二 99%TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2)  组织因子途径抑制剂-2抗原

98%乙酰乙酸基烯酸乙酯 95%TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1)  TGF-β诱导早期应答基因1抗原

环基酮 98%2,2-双(羟甲基)酸 98%TGF- BetaR1/ALK (TGF-beta receptor type I)  转移生长因子–β受体1抗原

4-氯-4'-氟苯丁酮 97%1,4-丁二 AR,98%Thioredoxin 1(ERdj5)  硫氧还蛋白抗原

6-氯-2-己酮 98%1,3-丁二 99%Tie1/JTK14 peptide  上皮生长因子样域激1抗原

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操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

 


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