脂肪酸合成酶(FAS)紫外分光光度法

脂肪酸合成酶(FAS)紫外分光光度法

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2022-04-24 12:20:12
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产品简介

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详细介绍

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

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商品属性:

产品名称

脂肪酸合成酶(FAS)紫外分光光度法

规格

10管/9样

检测方法

紫外分光光度法

货号

GOY-01S6366

商品介绍:

测定意义

细胞内脂质的积累是脂质合成与分解失衡的结果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,会导致细胞内脂质积累。FAS是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰和丙二酰而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理

NADPH为还原力,FAS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成长链脂肪酸;通过测定NADPH的减少量,即可推算出FAS活性。

实验中所需仪器和用品

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

小鼠肾损伤分子1Anti-PEX5 Antibody人Rap交换因子1(RAPGEF1)elisa定量检测试剂盒

人角蛋白20Anti-PEX3 Antibody人S抗原(SAG)elisa定量检测试剂盒

大鼠骨粘连蛋白Anti-PEX7 Antibody人43KDa Tar DNA结合蛋白(TDP43)elisa定量检测试剂盒

小鼠抗单核抗体Anti-PEX7 Antibody人T急性母白血病相关抗原(TALLA-1/CD231)elisa定量检测试剂盒

小鼠脂蛋白αAnti-PFKFB1 Antibody人β-骨胶原交联(β-CTx)elisa定量检测试剂盒

β内啡肽Anti-PFKFB2 Antibody人半乳糖苷α(GLα)elisa定量检测试剂盒

大鼠游离脂肪酸Anti-PFKP Antibody人半乳糖苷β(GLβ)elisa定量检测试剂盒

N端前脑钠素Anti-PFKM Antibody人GATA结合蛋白5(GATA5)elisa定量检测试剂盒

脂肪酸合成酶(FAS)紫外分光光度法锑标准溶液 100mg/L,溶剂:1%盐Schlafen家族14抗体

锑标准溶液1.24±0.26mg/LSEMCAP3蛋白抗体

砷标准溶液 100mg/L,溶剂:微量盐小泛素相关修饰蛋白1抗体

中标样 分析标准品Smad蛋白相互作用蛋白1抗体

水质标样 浓度范围:0.9,2.01(mg/L),分析标准品 细菌表面蛋白抗体

烯标准溶液7.0mg/L,溶剂:二硫化碳化14-3-3 α/β/ζ抗体

-2,4-二腙 分析标准品丝氨棕榈酰转移1抗体

中阿特拉津标样 浓度范围:100(mg/L),分析标准品脂肪转运蛋白5抗体

氨标准溶液500mg/L,溶剂:水分拣微管连接蛋白抗体

氨标准溶液 1000μg/ml丝氨蛋白抑制剂A10抗体

标准溶液 100mg/L,溶剂:水丝氨蛋白抑制剂B1抗体

标准溶液 1000μg/ml,溶剂:丝氨蛋白抑制剂B11抗体

标准溶液 0.989mg/ml,体:丝氨蛋白抑制剂B3抗体

标准溶液 100μg/ml,溶剂:丝氨/苏氨蛋白激SIK2抗体

标准溶液 100μg/ml,u=4%神经元特异性蛋白3抗体

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