土壤酸性磷酸酶(SACP)荧光法检测试剂盒

土壤酸性磷酸酶(SACP)荧光法检测试剂盒

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2022-04-27 15:41:13
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产品简介

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详细介绍

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商品属性:

产品名称

土壤酸性磷酸酶(SACP)荧光法检测试剂盒

规格

100管/96样

检测方法

荧光法

货号

GOY-01S6838

商品介绍:

测定意义

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围,分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理:

碱性环境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成和,通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

自备仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

橡胶PTFE垫片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特荧光燃料,33342 98%Anti-DCN/FITC  荧光素标记抗核心蛋白聚糖抗体IgG

中空纯四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞内钙荧光探针BAPTA, AM  95%Anti-DCP/FITC  荧光素标记异常原/脱-γ-羧基原抗体IgG

橡胶覆PTFE垫片,匹配30Zss黑色低盖,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素 90%Anti-DCP /HRP  辣根过氧化物标记异常原/脱-γ-羧基原抗体IgG

橡胶覆PTFE垫片,匹配500MLZPA棕色瓶低盖,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰甲酯1 mg/ml,溶剂:DMSOAnti-DCX/FITC  荧光素标记双皮质素抗体IgG

500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰甲酯Mixed isomersAnti-Phospho-Doublecortin (Ser297) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠等化双皮质素抗体IgG

30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧基荧光素 95%Anti-D-DIMER/FITC  荧光素标记交联纤维蛋白二聚体抗体IgG

PTFE垫片,匹配2ml棕色螺纹玻璃瓶和瓶盖,φ9*1.55-羧基荧光素 95%Anti-DDAH-II /FITC   荧光素标记双甲基精水解2抗体IgG

PTFE垫片,匹配3ml棕色螺纹玻璃瓶和瓶盖,φ11.8*1.55-羧基四甲基罗丹明 95%Anti-DDB1/FITC  荧光素标记损伤DNA结合蛋白1抗体IgG

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操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

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