土壤脱氢酶(SDHA)可见分光光度法检测试剂盒

土壤脱氢酶(SDHA)可见分光光度法检测试剂盒

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2022-04-27 15:50:53
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产品简介

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详细介绍

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商品属性:

产品名称

土壤脱氢酶(SDHA)可见分光光度法检测试剂盒

规格

50管/48样

检测方法

可见分光光度法

货号

GOY-01S6844

商品介绍:

测定意义

土壤脱氢酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤体系内活性微生物量以及其对有机物的降解活性,可以作为土壤微生物的降解性能指标。

测定原理:

氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得土壤脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品:

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、漏斗,滤纸、可见分光光度计、玻璃比色可见分光光度计/酶标仪、1 mL玻璃比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、丙酮(不允许快递,请用户自备)。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

4-羟基苯甲酸异丁酯 99%N4-苯甲酰基-2'-脱氧胞苷 98.0 %Anti-Nm23/FITC  荧光素标记肿瘤转移抑制基因抗体IgG

4-羟基苯甲酸异酯 99%盐酸环胞苷 98%Anti-Nm23-H1/FITC  荧光素标记肿瘤抑制基因抗体IgG

尼泊金甲酯 AR,99.0%2′-脱氧胞苷-5′-二钠盐 98%Anti-Nm23-H2/FITC  荧光素标记肿瘤抑制基因抗体IgG

尼泊金甲酯 CP,98.0%2′-脱氧腺苷-5′-单 98%Anti-Nociceptin/FITC  荧光素标记孤菲肽/痛敏肽抗体IgG

尼泊金甲酯 分析标准品,99.5%2'-脱氧 98%Anti-Nociceptin receptor/FITC  荧光素标记孤菲肽受体/痛敏肽受体抗体IgG

尼泊金甲酯 for insect cell culture,≥99.0%2',3'-二脱氧腺苷 98%Anti-NMP22/FITC  荧光素标记核基质蛋白22抗体IgG

尼泊金甲酯 ≥99%, FCC二叔丁基硅基双(三氟磺酸)  97%Anti-Nogo-A/NEP /FITC  荧光素标记轴索过度生长抑制因子-A抗体IgG

对羟基苯甲酸酯钠 USP,Ph Eur2',3'-二脱氧胞苷 99.0%Anti-Nogo-B/A /FITC  荧光素标记轴索过度生长抑制因子-B/A抗体IgG

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操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

 


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