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操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
商品属性：
产品名称 | |
规格 | 50管/48样 |
检测方法 | 可见分光光度法 |
货号 | GOY-01S6578 |
商品介绍：
测定意义
PDH（EC 4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。
测定原理
PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原WST-8产生黄色物质，从而导致450nm光吸收的增加。
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
实验方法学：
一、肝素的配制： 市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。 肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。 | 二、血液样本的收集： 全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA。 |
选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
Alexa Fluor 555标记的小鼠抗牛IgGAnti-TF Antibodyartemether71963-77-4说明书
Alexa Fluor 647标记的小鼠抗牛IgGAnti-TF Antibody朝藿定B110623-73-9说明书
PE-Cy5.5标记的小鼠抗牛IgGAnti-TF Antibody(原货号PB0879)黄连碱氯6020-18-4品牌
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碱性（AP）标记的小鼠抗牛IgGAnti-TFAM Antibodysakakin21082-33-7说明书
胶体金标记的小鼠抗牛IgGAnti-TFEB Antibody白藓碱484-29-7价格
Cy3标记的小鼠抗牛IgGAnti-TFF1 Antibody知母皂苷A341059-79-4规格
丙酮酸脱氢酶（PDH)可见分光光度法 99.99% metals basis化蛋白激C抗体 PKC εBMP4 骨形态发生蛋白4抗体
2-乙蒽醌 97%血小板源性生长因子C抗体BMP11 骨形态发生蛋白11抗体
邻氧 CP,97%血小板源性生长因子D(脊髓源性生长因子B)BMP10 骨形态发生蛋白10抗体
对氧 97.0%非典型蛋白激C特定相互作用蛋白抗体BMP1 骨形态发生蛋白1/胶原C蛋白肽链内切抗体
4-异酯 98%原钙粘蛋白13抗体BMI-1/PCGF4 组蛋白相关Bmi1抗体
3,4-二异酯 97% 26S蛋白调节亚型抗体Bmf/Bcl2 modifying factor Bcl2蛋白修饰因子抗体
3-氨-4-戊 98%原钙粘蛋白β11抗体BMAL1 芳香烃受体核转位蛋白样1抗体
2-酚 99%轴周蛋白PRX抗体Blood Group Lewis a 血型抗原Lewis A抗体
对 98%猪蓝耳病病GP5蛋白抗体Blood Group Lewis a 血型Lewis a抗体
2- 98%p21激活激1抗体Blood Group Kell Antigen/CD238 凯尔血型糖蛋白CD238抗体
1,4-二 97%蛋白质二硫键异构抗体Blood Group Antigen Precursor 血型抗原前体蛋白抗体
2,2'-二硫双(5-硝吡) 97%脯氨酰羟化抗体BLNK B淋巴连接蛋白抗体
