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【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称 | 规格 | 检测方法 | 货号 |
100管/96样 | 微量法 | GOY-01S6585 |
商品介绍
测定意义 MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。 测定原理: MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行
匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10
4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于 1,建议将试剂二用蒸馏水稀释 7 倍后使用(10μL 试剂二原液+60μL蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?对照管的范围是 0.4-1。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;
(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间 30min可以延长到 40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般
将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10倍后再测,通常可以使测定正常。
氢氟酸 ACS二氯乙 分析标准品HCV-NS1 型肝炎病-NS1(抗原)
氢氟酸 电子级,49wt. % in H2O,≥99.99998%metals basis3,3-二甲基丁酰氯 98%HCV-NS3 型肝炎病-NS3(抗原)
异 standard for GC,≥99.9% (GC) 乙酯 98%HCV-NS4a 型肝炎病-NS4a(抗原)
异 for HPLC, 99.8% 甲酯 99%HEV 戊型肝炎病(抗原)
异 农残级, 99.9%三氯乙 98%HGV(Hepatitis G vivus) 庚型肝炎病(抗原)
异 用于分子生物学, ≥99.5% (GC)碳酸钴(II) CP,Co 43.0 - 47.0 %HIV-1(gp41) 艾滋病病(抗原)
异 for LC-MS, ≥99.9% (GC)碳酸钴(II) AR,Co 43.0 - 47.0 %HIV gp120 艾滋病病(抗原)
线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)微量法检测试剂盒碳钡-13C 丰度:99atom%;化学纯度:≥99%氧化固结合蛋白4抗体C2CD4C/NLF3 限局性核因子3抗体
丰度:10atom%;化学纯度:≥98.5% 抗凋亡蛋白OLFM44抗体C2CD2/C21orf25 21号染色体开放阅读框25抗体
丰度:99atom%;化学纯度:≥98.5%结肠癌过度表达蛋白1抗体C22orf9 22号染色体开放阅读框9抗体
丰度:10atom%;化学纯度:≥98.5%卵巢癌免疫反应抗原抗体C22orf36 22号染色体开放阅读框36抗体
丰度:99atom%;化学纯度:≥98.5% 卵巢癌相关因1抗体C22orf31 22号染色体开放阅读框31抗体
丰度:10atom%;化学纯度:≥98%氧化应激诱导生长抑制因子1抗体C22orf25 22号染色体开放阅读框25抗体
丰度:99atom%;化学纯度:≥98%氧化固结合蛋白8抗体C21orf87 21号染色体开放阅读框87抗体
丰度:10atom%;化学纯度:≥98.5%泛素特异性蛋白OTB1抗体C21orf70 21号染色体开放阅读框70抗体
丰度:99atom%;化学纯度:≥98.5%视神经相关蛋白1抗体C21ORF62 21号染色体开放阅读框62抗体
丰度:10atom%;化学纯度:≥98.5%鸟氨脱羧抗1抗体C21orf58 21号染色体开放阅读框58抗体
丰度:99atom%;化学纯度:≥98.5%嗅觉受体家族5亚1抗体C21ORF56 21号染色体开放阅读框56抗体
甘氨-15N 丰度:10atom%;化学纯度:≥98.5%胚胎干关键蛋白抗体C21orf55/DnaJC28 21号染色体开放阅读框55抗体
甘氨-15N 丰度:99atom%;化学纯度:≥98.5%抗体C21orf55/DnaJC28 21号染色体开放阅读框55抗体
丰度:10atom%;化学纯度:≥98.5%肿瘤/抗原117C21orf2 21号染色体开放阅读框2抗体
丰度:99atom%;化学纯度:≥98.5%鸟氨脱羧抗2抗体C21orf128 21号染色体开放阅读框128抗体
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。