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测定意义

硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理

亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少，即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。

实验方法学：

选择抗凝的注意点：

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

芳香烃受体核转录蛋白样2抗体Human MAML3 ELISA Kit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（vWF）ELISA试剂盒,

化芳香N-乙酰化转移抗体Human MAN2B2 ELISA Kit小鼠纤溶抗纤溶复合物（PAP）ELISA试剂盒,

肌动蛋白结合蛋白1抗体Human MAN1A2 ELISA Kit抗糖蛋白抗体（GP）ELISA试剂盒--动物，人

粘附分子IgG样结构域蛋白2抗体Human MANBAL ELISA Kit百日咳素（PT）ELISA试剂盒--动物，人

肌动蛋白结合蛋白DOC6抗体Human MANSC1 ELISA Kit血吸虫（schistosoma）ELISA试剂盒--动物，人

AFG3样蛋白2/脊髓小脑共济失调蛋白28抗体Human MANEA ELISA Kit轮状病抗原（RV Ag）ELISA试剂盒--动物，人

激活素受体相互作用蛋白1抗体Human MAP4K1(MEK Kinase Kinase 1) ELISA Kit钙调素（CAM）ELISA试剂盒--动物，人

固酮类还原家族7成员A2抗体Human MAP4K2 ELISA Kit小鼠P选择素（P-Selectin/CD62P）ELISA试剂盒,

亚硝酸还原酶(NiR)微量法检测试剂盒三吡咯烷溴化鏻六氟盐 98%小鼠性β葡萄糖苷(GBA)免疫试剂盒淀粉样蛋白β前体样蛋白2抗体Thy-1/CD90/ Thy1.1  CD90抗体

2-溴-1,3,5-三异 96.0 %小鼠丝裂原激活的蛋白激/MAP激(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)免疫试剂盒淀粉样蛋白β前体样蛋白1抗体THSD1  血小板跨膜反应蛋白1抗体

6-并三氮唑-1,1,3,3-四脲六氟酯 98% 小鼠丝氨转肽抑制剂Kazal type 3(SPINK3)免疫试剂盒转录激活蛋白crsp70抗体THRSP  状反应蛋白抗体

2--1,3-二咪唑鎓四氟盐 98%小鼠水通道蛋白9(AQP-9)免疫试剂盒卵巢、胎盘、前列腺、蛋白22抗体Thrombospondin 2  血小板反应蛋白2/敏感蛋白2抗体

6--1-羟并三氮唑 98%小鼠水通道蛋白5(AQP-5)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白33B抗体Thrombomodulin/CD141  血栓调节蛋白抗体

1-(-1-吡咯烷亚)吡咯烷六氟盐 98%小鼠水通道蛋白4(AQP-4)免疫试剂盒载脂蛋白C3抗体thrombin II  Ⅱ(II)抗体

2--1,3-二化咪唑鎓 90%小鼠水通道蛋白3(AQP-3)免疫试剂盒凋亡增强核抗体Thrap3/TRAP150  状受体相关蛋白3抗体

代二哌碳鎓六氟盐 98%小鼠水通道蛋白2(AQP-2)免疫试剂盒染色体脆弱性相关因抗体THRA1+2  状受体α1+α2抗体

代三吡咯烷鏻六氟盐 98%小鼠水通道蛋白1(AQP-1)免疫试剂盒化蛋白激B抗体THRA1  状受体α1抗体

多肽试剂TCTU 98%小鼠水通道蛋白0(AQP-0)免疫试剂盒铜转运蛋白质β链抗体THOC2  转录因子THOC2抗体

2--1,3-二咪唑六氟盐 98%小鼠双氢睾酮(DHT)免疫试剂盒酰辅A合成家族4抗体Thioster-containing protein 1  按蚊硫酯包含蛋白-1抗体

3-(二乙氧酰氧)-1,2,3-并三-4-酮 98% 小鼠瘦素(LEP)免疫试剂盒性样蛋白2抗体Thioredoxin 2  线粒体硫氧还蛋白2抗体

代二乙酯 纯度 ≥90%小鼠嗜性粒阳离子蛋白(ECP)免疫试剂盒AHNAK核蛋白2抗体Thioredoxin  硫氧还蛋白抗体

2-(2-吡酮-1-)-1,1,3,3-四脲四氟盐  99%小鼠嗜性粒过氧化物(EPO)免疫试剂盒二腺苷核糖化因子6相互作用蛋白抗体THAP1  核凋亡因子THAP1抗体

N,N'-二环己碳二亚 99.0%小鼠嗜粒趋化因子(ECF)免疫试剂盒p53诱导蛋白5抗体TH/T-H glycoprotein  TH糖蛋白抗体

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。