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操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
商品属性:
产品名称 | |
规格 | 50管/24样 |
检测方法 | 可见分光光度法 |
货号 | GOY-01S6430 |
商品介绍:
测定意义
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
测定原理:
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在460nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、1 mL玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。
实验方法学:
一、肝素的配制: 市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液样本的收集: 全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA。 |
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
2,4,4-基-1-戊烯 98%蒿本内酯 分析标准品,≥90%Anti-Crk p38 (phospho Y221) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化Crk p38抗体IgG
十一烷 98%分析标准品Anti-DAT1/FITC 荧光素标记抗多巴相关转录因子1抗体IgG
十一烷 99% 98%Anti-DBH /FITC 荧光素标记多巴β羟化抗体IgG
二乙烯苯 80% 分析标准品Anti-DCC/FITC 荧光素标记兔抗结直肠癌缺失基因抗体IgG
二乙烯苯 50% 98%Anti-DC-LAMP/LAMP-3/CD208/FITC 荧光素标记CD208抗体IgG
二乙烯苯 55%铝,十八水 Ph. Eur., BP, 100-110%, 51.0-59.0% Al2(SO4)3 Anti-DC-SIGN/CD209/CLEC4L/FITC 荧光素标记CD209抗体IgG
纳米二氧化锡 99.9% metals basis,50-70nm铝 99.99% metals basisAnti-DC-SIGNR/CD299/FITC 荧光素标记CD299抗体IgG
AMBERLITE IRA402 CL阴离子交换树脂 氯型赫斯特荧光燃料,33258 98%Anti-DCIR/CLEC4A/FITC 荧光素标记C型凝集素结构域家族4成员A抗体IgG
二胺氧化酶(DAO)可见分光光度法检测试剂盒N,N'-琥珀酰亚碳酯 98%Anti-CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗体人端粒逆转录(TERT)联免疫吸附测定试剂盒
4-二氨吡 99%Anti-CD80/B7-1 激分子B7-1蛋白抗体人趋化因子CX3C受体1(CX3XR1)联免疫吸附测定试剂盒
4,4'-二氧三 98%Anti-CD71/TFR 转铁蛋白受体抗体人粘蛋白3(MUC3)联免疫吸附测定试剂盒
4,5-二咪唑 98%Anti-B7-1/CD80 激分子B7-1蛋白抗体人趋化素样因子超家族成员4(CKLFSF4)联免疫吸附测定试剂盒
4,5-二咪唑 99%Anti-CD73 胞浆-5´-核苷-Ⅱ抗体人趋化素样因子超家族成员5(CKLFSF5)联免疫吸附测定试剂盒
二吡咯烷(N-琥珀酰亚氨氧)碳六氟盐 98%Anti-CD79A/IGBP-1 免疫球蛋白结合蛋白-1抗体人趋化素样因子超家族成员6(CKLFSF6)联免疫吸附测定试剂盒
4-(4,6-二氧三)-4-吗啉盐盐 97%Anti-CD82/KAI1 肿瘤转移抑制蛋白1抗体人趋化素样因子超家族成员7(CKLFSF7)联免疫吸附测定试剂盒
3,5-二叔丁溴 99%Anti-CD83/HB15 CD83抗体人趋化素样因子超家族成员8(CKLFSF8)联免疫吸附测定试剂盒
O-[(乙氧羰)]-N,N,N',N'-四硫尿四氟盐 98%Anti-CD84/SLAMF5 CD84抗体人趋化素样因子(CKLF)联免疫吸附测定试剂盒
1-乙-(3-二氨)碳二亚盐盐 98.5% Anti-CD8 CD8单克隆抗体人粘蛋白4(MUC4)联免疫吸附测定试剂盒
2-乙氧-1-乙氧碳酰-1,2-二氢喹啉 99%Anti-CD86/B7-2 CD86抗体人粘蛋白6(MUC6)联免疫吸附测定试剂盒
2-氟-1,3-二化咪唑翁六氟酯 97%Anti-CD244 CD244抗体人心脏肌球蛋白结合蛋白C(MYBPC3)联免疫吸附测定试剂盒
乙脒 99%Anti-BLAME/SLAMF8 BLAME抗体人肌球蛋白重链10(MYH10)联免疫吸附测定试剂盒
四氟代脲六氟酯 98%Anti-Cdc2/CDK1 周期素依赖激1抗体人肌球蛋白重链9(MYH9)联免疫吸附测定试剂盒
9-芴-N-琥珀酰亚碳酯 98%Anti-Phospho-cdc2 (Thr14) 化周期素依赖激2抗体人肌球蛋白轻链9(MYL9)联免疫吸附测定试剂盒