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操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
商品属性:
产品名称 | |
规格 | 50管/48样 |
检测方法 | 可见分光光度法 |
货号 | GOY-01S7012 |
商品介绍:
测定意义
植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分,除了起结构支撑、物质运输等作用外,还具有抵抗逆境的作用。果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。
测定原理
果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇,甲醇与2,4-戊二酮反应显色,在412nm下测定吸光值;同时半乳糖醛酸在70℃下与浓硫酸反应生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸,5-甲酰基-2-呋喃甲酸与3,5-二甲基反应产生有色物质,在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。
实验方法学:
一、肝素的配制: 市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液样本的收集: 全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA。 |
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
四己基氢铵 用于离子色谱, ≥99.0% (T)N,N'-二环己基碳二亚 99.0%Anti-CD74/MHC II CD74抗体
N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 99%N,N'-琥珀酰亚基碳酸酯 98%Anti-CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗体
N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 97%4-二甲吡 99%Anti-CD80/B7-1 激分子B7-1蛋白抗体
2,4,5-三氯苯 分析标准品,99%4,4'-二甲氧基三苯基氯 98%Anti-CD71/TFR 转铁蛋白受体抗体
1,2,3,4-四氯苯 分析标准品,98%4,5-二基咪唑 98%Anti-B7-1/CD80 激分子B7-1蛋白抗体
5-硫代-D-葡萄糖 96%4,5-二基咪唑 99%Anti-CD73 胞浆-5´-核苷酸-Ⅱ抗体
三溶液 50%溶液二吡咯烷基(N-琥珀酰亚氨氧基)碳六氟盐 98%Anti-CD79A/IGBP-1 球蛋白结合蛋白-1抗体
二十三烷 分析标准品,99.5%4-(4,6-二甲氧基三)-4-甲基吗啉盐酸盐 97%Anti-CD82/KAI1 肿瘤转移抑制蛋白1抗体
果胶甲酯化程度可见分光光度法检测试剂盒大鼠肝细胞生长因子激活物(HGFA)免疫试剂盒进口、组装
猪雌二醇(E2)免疫试剂盒现货供应
大鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)免疫试剂盒*直销
大鼠清除受体富含半胱1型蛋白M130/CD163分子,CD163 免疫试剂盒现货供应
鸡L苯丙解氨(PAL)免疫试剂盒现货供应
绵羊中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)免疫试剂盒*直销
大鼠髓过氧化物(MPO)免疫试剂盒进口、组装
3氧代5α类固醇4脱氢2(SRD5A2)免疫试剂盒进口、分装
瞬态电压感受器阳离子通道,子类V,成员4(TrpV4)免疫试剂盒进口、组装
牛胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒*直销