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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品属于：
产品名称：小鼠单核巨噬细胞
产品英文：J774A.1
货号：FS-01X9665
细胞培养条件：DMEM+10%FBS+1%P/S
生长状态：贴壁生长
产品规格：1×106
单位：T25/瓶
是否提供细胞STR鉴定：不提供STR鉴定报告
保存培养温度（℃）37
运输温度（℃）：常温
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞 在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 |
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。 2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。 3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。 6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 |
人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒Human soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit
人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒Human Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA Kit
人组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit
人干扰诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒Human interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit
人巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA试剂盒Human macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit
人结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒Human connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit
人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA试剂盒 Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor,BAFF-R ELISA Kit
人血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit
人血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit
人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D ELISA Kit
人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C ELISA Kit
人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒 Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA Kit
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 4,TRAIL-R4 ELISA Kit
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA Kit
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1,TRAIL-R1 ELISA Kit
人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA Kit
人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-ⅠELISA Kit
人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒 Human Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit
人干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA Kit
小鼠单核巨噬细胞Adducin protein 内收蛋白抗体 0.1ml
phospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 磷化原癌基因c-Jun抗体 0.1ml
Gibberellins 抗赤霉抗体 0.1ml
phospho-AQP2(Ser264/261) 磷化水通道蛋白2抗体 0.1ml
Mycobacterium bovis 牛结核杆菌菌体蛋白抗体 0.2ml
CK12/Cytokeratin 12 细胞角蛋白12抗体 0.2ml
HE4/Epididymal secretory protein E4 附睾分泌蛋白4抗体 0.2ml
Beta galactosidase β半乳糖抗体 0.2ml
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
