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上海市所在地
产品属于:
产品名称:胸腺上皮细胞
产品规格:5×105
货号:FS-01X9879
产品类型:原代细胞
单位:T25/瓶
提供细胞鉴定:提供免疫荧光鉴定报告
保存培养温度(℃):37
运输温度(℃):常温
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 |
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项:
1. 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。 2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。 3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。 6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。 |
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
兔纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit规格:96T/48T
兔子白介2(IL-2)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit规格:96T/48T
兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit规格:96T/48T
兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit nitric oxide,NO ELISA Kit 规格:96T/48T
兔补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Complement 3,C3 ELISA Kit规格:96T/48T
兔p物质(SP)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Substance P,SP ELISA Kit规格:96T/48T
兔子层连蛋白/板层(LN)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Laminin,LN ELISA Kit规格:96T/48T
兔环磷腺(cAMP)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit规格:96T/48T
兔血管性血友病因子/瑞斯托霉辅因子(VWF)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit von Willebrand Factor,VWF ELISA Kit规格:96T/48T
兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒 英文名称:Rabbit Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA Kit规格:96T/48T
兔骨桥(OPN)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Osteopontin,OPN ELISA Kit 规格:96T/48T
兔子脂蛋白磷脂A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit规格:96T/48T
兔血清总补体(CH50)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit 50% complement hemolysis,CH50 ELISA Kit规格:96T/48T
兔乙酰受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit 规格:96T/48T
兔诱导型一氧化氮合成(iNOS)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA Kit 规格:96T/48T
兔热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Heat Shock Protein 90,HSP-90 ELISA Kit规格:96T/48T
兔热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit规格:96T/48T
兔热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒英文名称:Rabbit Heat Shock Protein 40,HSP-40 ELISA Kit规格:96T/48T
胸腺上皮细胞ANKRD11 锚蛋白重复结构域蛋白11抗体规格: 0.2ml
ANKRD12 锚蛋白重复结构域蛋白12抗体规格: 0.2ml
ANKRD13A 锚蛋白重复结构域蛋白13A抗体规格: 0.2ml
ANKRD9 锚蛋白重复结构域蛋白9抗体规格: 0.2ml
APM2 脂肪特定转录因子2抗体规格: 0.2ml
ANKS1A 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体规格: 0.2ml
APOL3 载脂蛋白L3抗体规格: 0.2ml
ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 肿瘤/睾丸抗原81抗体规格: 0.2ml