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上海市所在地
产品属于：
产品名称：小鼠气道平滑肌细胞
产品英文：ASMC
货号：FS-01X9634
细胞培养条件：1640+10%FBS+1%P/S
生长状态：贴壁生长
产品规格：1×106
单位：T25/瓶
是否提供细胞STR鉴定：不提供STR鉴定报告
保存培养温度（℃）37
运输温度（℃）：常温
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞 在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。 2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。 3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。 6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 |
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
人白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒 Human Interleukin-2 receptor，IL-2R ELISA Kit
人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒Human Interferon β，IFN-β/IFNB ELISA Kit
人转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒 Human transforming growth factors β2，TGFβ2 ELISA Kit
人白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒Human leukotriene D4，LT-D4 ELISA Kit
人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA试剂盒 Human growth hormone relasing factor，GH-RF ELISA Kit
人巨噬细胞趋化因子(MCF)ELISA试剂盒 Human macrophage chemotatic factor，MCF ELISA Kit
人α/β干扰素受体(IFN-α/βR)ELISA试剂盒 Human Interferon α/βReceptor，IFN-α/βR ELISA Kit
人B细胞生长因子(BCGF)ELISA试剂盒 Human B cell growth protein，BCGF ELISA Kit
人B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒 Human B cell differetiation factor，BCDF ELISA Kit
人可溶性粘附分子(Sam)ELISA试剂盒 Human soluble adhesion molecules，Sam ELISA Kit
人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒Human Perforin/Pore-forming protein，PF/PFP ELISA Kit
人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒Human pleiotrophin，PTN ELISA Kit
人淋巴细胞因子ELISA试剂盒Human lymphocyte factor ELISA Kit
人神经保护因子(CVNPF)ELISA试剂盒 Human Cobra venom neuronal protective factor，CVNPF ELISA Kit
人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)ELISA试剂盒Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor，sTNFαR ELISA Kit
人可溶性细胞因子受体(sCKR)ELISA试剂盒Human soluble cytokine receptor，sCKR ELISA Kit
人集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒Human colony-stimulating factor，CSF ELISA Kit
人凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒Human apoptosis inducing factor，AIF ELISA Kit
人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)ELISA试剂盒Human Placenta Cadherin，P-cad ELISA Kit
小鼠气道平滑肌细胞beta-Amyloid(35-42) β淀粉样肽/Aβ42抗体 0.1ml
ER α 雌激素受体α抗体 0.1ml
CKLFSF2/CMTM2 趋化素样因子超家族成员2抗体 0.2ml
COX7A2 c氧化酶VIIA亚型2抗体 0.1ml
CKLFSF2 isoform 1 趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体 0.2ml
MAP65/ASE 1 拟南芥MAP65蛋白抗体 0.2ml
Streptavidin/SA protein 链酶亲和素抗体 0.1ml
human Serum IgA 人血清型免疫球蛋白A抗体 0.2ml
