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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品属于：
产品名称：原代破骨细胞培养体系
产品规格：100ml/500ml
货号：FS-01X9976
保存温度（℃）：2-8℃/-20℃
运输温度（℃）：2-8℃/-20℃
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞 在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 |
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。 2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。 3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。 6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 |
Prostaglandin D2 Synthase, Hematopoietic (PTGDS)前列腺D合(PTGDS)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Electron Transfer Flavoprotein Beta Polypeptide (ETFb)电子转移黄蛋白β(ETFβ)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Phosphoglycerate Mutase 2, Muscle (PGAM2)磷甘油变位2(PGAM2)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor (MLZE)黑瘤衍生亮拉链额外核因子(MLZE)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Desmin (Des)结蛋白(Des)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Cholinergic Receptor, Nicotinic, Beta 1 (CHRNb1)烟碱型受体β1(CHRNβ1)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)心肌肌钙蛋白I(TNNI3)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)低氧诱导因子1α(HIF1α)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Lactoferrin (LTF)乳铁传递蛋白(LTF)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Potassium Chloride Cotransporters 4 (KCC4)钾氯协同转运蛋白4(KCC4)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Potassium Chloride Cotransporters 2 (KCC2)钾氯协同转运蛋白2(KCC2)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Potassium Chloride Cotransporters 3 (KCC3)钾氯协同转运蛋白3(KCC3)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Chemokine C-C-Motif Receptor 7 (CCR7)趋化因子C-C-基元受体7(CCR7)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Beta-2-Microglobulin (b2M)β2-微球蛋白(β2M)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Trefoil Factor 3, Intestinal (TFF3)三叶因子3(TFF3)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Myostatin (MSTN)肌肉生长抑制(MSTN)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Immunoglobulin Superfamily, Member 16 (IGSF16)免疫球蛋白超家族成员16(IGSF16)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
Erythropoietin (EPO)红细胞生成(EPO)检测试剂盒(联免疫吸附试验法)规格：48T/96T
原代破骨细胞培养体系FBXO28 FBXO28蛋白抗体规格: 0.2ml
FBXO27 FBXO27蛋白抗体规格: 0.2ml
FBXO24 FBXO24蛋白抗体规格: 0.2ml
hnRNP A2B1 异质核糖核蛋白hnRNPA2抗体规格: 0.2ml
hnRNP U 异质核糖核蛋白U抗体规格: 0.2ml
AIM1L 黑色瘤缺失样蛋白1抗体规格: 0.2ml
AHNAK2 AHNAK核蛋白2抗体规格: 0.2ml
AGXT2L2 AGXT2L2蛋白抗体规格: 0.2ml
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
