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商品介绍:
测定意义: APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化 AsA 还原 H2O2,是 植物AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量,在胁迫和解胁迫条件下,APX与AsA具有一定的负相关性。 测定原理: APX 催化 AsA 还原 H2O2,通过测定AsA的氧化量可计算得APX活力。 实验中所需仪器及设备: 研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、移液枪、双蒸水。 |
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
抗坏血酸过氧化物酶(APX)紫外分光光度法 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | BJ-0161142-2 |
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。
注意事项:
待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。
标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。
抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
5、再现性好:变异系数CV=1.7%。
6、回收试验: X =103.3%。
7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。
锌指蛋白ZBTB7C抗体桔林油脂酵母UTP 溶液,2.5mM2mL
锌指蛋白ZBTB8A抗体淡紫拟青霉菌(现1)NMY51 酵母感受态10×100μL
锌指蛋白916B抗体副猪嗜血杆菌dNTP 和引物清除剂100 次
锌指蛋白903抗体小麦粉 水分、灰分 Taq 酶抗体1000U
锌指蛋白923抗体豇豆慢生根瘤菌植物种属鉴定 PCR Mix 3100 次
锌指蛋白288抗体香菇植物种属鉴定 PCR Mix 5100 次
锌指蛋白185抗体大肠埃希氏菌加 T 试剂盒50 次
锌指蛋白431抗体玫瑰拟层孔菌PCR LIC 克隆套装1μg
锌指蛋白379抗体黄赭色链霉菌DH10B 感受态0.1 mL×10
锌指蛋白804A抗体球孢白僵菌Deaza dGTP0.4mL
锌指蛋白693抗体淡紫紫霉m7G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物25 OD规格
锌指蛋白ZBTB3抗体葛氏菌质粒 ( 载体 ) 系列产品2μg
着丝粒ZWILCH蛋白抗体产黄青霉接头 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)5nmol
锌指蛋白57抗体鸽痘病dTTP 溶液,2.5mM2mL
锌指蛋白717抗体霍氏分支杆菌克必隆零背景 T 载体20 次规格
抗坏血酸过氧化物酶(APX)紫外分光光度法血小板反应蛋白4(TSP-4)试剂盒 Anti-EIF2B1 Antibody衰老抑制基因蛋白
间变性瘤激酶(ALK)试剂盒 Anti-EIF2AK4 Antibody中间丝相关蛋白
乳酸脱氢酶B(LDHB)试剂盒 Anti-EIF2S1 Antibody环指蛋白86
唾液酶α1(AMY1)试剂盒 Anti-EIF2S2 Antibody环指蛋白2
角膜蛋白(KERA)试剂盒Anti-EIF3E Antibody环指蛋白44
β样前体蛋白(βAPP)试剂盒Anti-EIF4A1 Antibody环指蛋白40
胰岛su样生长因子2受体(IGF2R)试剂盒Anti-EIF3B Antibody环指蛋白8