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商品介绍:
测定意义: ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和CO2,以及伴随NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物ME活性测定较多,已经成为抗氧化研究的热点。根据fu酶专一性和对底物特异性的不同,可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 测定原理: NADP-ME催化NADP+还原成NADPH,在340nm下测定NADPH增加速率。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 |
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
NAD苹果酸酶(NADME)测试盒微量法 | 微量法 | 100管/96样 | BJ-0161121-1 |
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。
注意事项:
待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。
标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。
抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
5、再现性好:变异系数CV=1.7%。
6、回收试验: X =103.3%。
7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。
磷酸化NF-κB活化激酶抗体产气荚膜梭菌 suC型人肠微血管内皮*培养基
马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体猪丹丝菌RBE, 人肝胆管癌
磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体不动杆菌SF9, 昆虫卵巢
磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体苏云金芽孢杆菌肯尼亚亚种人胃粘膜上皮*培养基
磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体变形假单胞菌人胰腺星状*培养基
磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体异常汉逊酵母HSC-T6, 大鼠肝星状系
磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体圆锥节丛孢人心房肌*培养基
磷酸化微管相关蛋白抗体链状镰孢人脐带单核*培养基
非受体型酪an酸蛋白激酶Tnk1抗体木糖葡糖酸醋杆菌人肺成纤维*培养基
磷酸化非受体型酪an酸蛋白激酶Tnk1抗体光帽鳞伞(滑菇)HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮
磷酸化DNA拓普西异构酶Ⅱ抗体大肠埃希氏菌人肠动脉内皮*培养基
环腺苷酸应答元件结合蛋白转录共激活因子TORC1抗体黏液杆菌人甲状腺滤泡上皮*培养基
磷酸化CREB转录共激活因子TORC1抗体秃裸链霉菌大鼠骨髓间充质干(BMSCs)
CREB转录共激活因子TORC2抗体水质粪大肠菌群质控样品(多管发酵法)HBE, 正常人支气管上皮系
肿瘤坏死因子β抗体(TNFβ)*蜜环菌人直结肠平滑肌*培养基
NAD苹果酸酶(NADME)测试盒微量法糖原合成酶激酶3β(GSK3β)试剂盒 Anti-CXCL10 Antibody类风湿因子
CC趋化因子受体1(CCR1)试剂盒 Anti-CXCL12 Antibody视网膜色su上皮特异性蛋白65
神经肽Y(NPY)试剂盒Anti-CXCL12 AntibodyRhoB蛋白
过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPAR-γ)试剂盒Anti-CXCL16 AntibodyG蛋白偶联受体135/松弛su受体3
生长调节致癌基因β(GROβ)试剂盒 Anti-CXCL13 Antibody丝an酸蛋白激酶1
多巴脱羧酶(DDC)试剂盒 Anti-CXCL13 Antibody(PB0726)环指蛋白41
促胰液su/su受体(SCTR)试剂盒Anti-CXCL2 Antibody核基质蛋白21