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商品介绍:
测定意义: MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的fu酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。 测定原理: MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。 |
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)紫外分光光度法 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | BJ-01611148-2 |
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。
注意事项:
待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。
标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。
抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
5、再现性好:变异系数CV=1.7%。
6、回收试验: X =103.3%。
7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。
基质金属蛋白mei20抗原酿酒酵母猴趋化因子CCL4样蛋白1(CCL4L1)elisa定量检测试剂盒
基质金属蛋白mei-17抗原赭曲霉猴前列腺suE合酶2(PTGES2)elisa定量检测试剂盒
基质金属蛋白mei-26抗原Burkholderia sp. 猴钙腔蛋白(CALU)elisa定量检测试剂盒
基质金属蛋白mei-9抗原杂色曲霉猴胱天蛋白mei9(P9)elisa定量检测试剂盒
基质金属蛋白mei-10抗原Asticcacaulis?兔趋化因子CC受体样蛋白1(CCRL1)elisa定量检测试剂盒
髓过氧化物酶抗原中国农大湖积物杆菌兔血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)elisa定量检测试剂盒
多药耐药相关蛋白2克鲁斯假丝酵母猴鸟苷酸结合蛋白4(GBP4)elisa定量检测试剂盒
多药耐药相关蛋白5抗原猴游离睾酮(F-TESTO)elisa定量检测试剂盒
线粒体核糖体蛋白L28(抗原)黑曲霉猴胞浆磷蛋白1(STMN1)elisa定量检测试剂盒
错配修复蛋白1抗原枯斑拟盘多毛孢兔前列腺酸性磷酸酶(ACP3/PAP)elisa定量检测试剂盒
胃粘液su抗原暗黄紫色小单孢菌兔免疫球蛋白G3(IgG3)elisa定量检测试剂盒
褪黑su受体1B抗原HLE(人肝癌(未分化))兔强啡肽(Dyn)elisa定量检测试剂盒
胃动su多肽根瘤菌兔GATA结合蛋白4(GATA4)elisa定量检测试剂盒
雷帕霉su靶蛋白根瘤菌猴丝an酸蛋白mei2(PRSS2)elisa定量检测试剂盒
粘蛋白-1/上皮膜贝氏隐饱子虫猴Ⅰ型胶原α1(COL1α1)elisa定量检测试剂盒
线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)紫外分光光度法和肽su(CPP)试剂盒 Anti-MAPK6 Antibody血管内皮生长因子受体2
胱天蛋白mei10(P10)试剂盒 Anti-MAPK8 Antibody血管内皮生长因子受体3
脂筏特征蛋白2(FLOT2)试剂盒 Anti-MAPT Antibody波形蛋白
紧密结合蛋白1(TJP1)试剂盒Anti-MAPK8 Antibody血管活性肠肽
血栓烷受体(TP/TXA2R)试剂盒Anti-MAS1 Antibody内脂su/内脏脂肪su/前B克隆增强因子1
巨噬清道夫受体1 (MSR1)试剂盒Anti-MAPK9 Antibody内脂su/内脏脂肪su/前B克隆增强因子1
阻抑su(PHB)试剂盒Anti-MASP2 Antibody玻璃粘连蛋白