CSL半胱氨酰亚砜裂解酶检测试剂盒微量法

CSL半胱氨酰亚砜裂解酶检测试剂盒微量法

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2022-04-11 14:02:51
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产品简介

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详细介绍

公司产品仅用于科研提供的生化试剂盒,质量信得过产品,售后完善。服务于高校及免疫学科研单位,竭诚为您提供更周到的服务更优质的产品。

产品名称:CSL半胱氨酰亚砜裂解酶检测试剂盒微量法

规格:100管/48样

检测方法:微量法

货号:FS-01S63414
商品介绍:

测定意义

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱),十字花科芸薹属

(如卷心菜,菜花,西兰花),以及豆科中的合金欢属中,并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精,以及产生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是内源性甲醛生成的关键酶之一,测定CSL活性对于研究食品安全具有重要意义。

测定原理

CSL催化S-甲基-L-半胱氨亚砜反应产生丙酮酸,与2,4-二硝基肼反应,在碱性条件下显棕红色,在510nm下有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;

试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
QQ截图20220307153604.png

粗酶液提取:

1、细胞或组织样品的制备:

培养细胞:先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),超声波破碎细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。

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CSL半胱氨酰亚砜裂解酶检测试剂盒微量法亚磷酯 98%连翘 分析标准品,>96.00% (HPLCInsulin Receptor- Beta(ISR- Beta)  胰岛受体-β(抗原)

亚磷酯 CP,95.0%  藤黄 97% (HPLC)IRS-1  胰岛受体底物-1(抗原)

2-基-4-甲基嘧 98%连翘脂 分析标准品,>98%AQP3(aquaporin 3)  水通道蛋白-3抗原

2,4-二氯嘧 98%原人参二 分析标准品,≥98%IRS-2   胰岛受体底物-2(抗原)

2,4-二氯-5-甲基嘧  98%番泻叶苷A 分析标准品,≥96%AQP1(Aquaporin1)  水通道蛋白-1抗原

2-羟基嘧盐盐 98%番泻苷B 分析标准品,≥97%(HPLC)IRS-3  胰岛受体底物-3(抗原)

2,4,6- 95%菝葜皂苷元 分析标准品,≥98%IRS-4  胰岛受体底物-4(抗原)

阿拉伯树胶 医药级知母皂苷A-Ⅲ 分析标准品,≥97%AQP5(aquaporin Protein-5)  水通道蛋白-5抗原

 


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