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上海市所在地
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 货号 |
石蜡切片(FFPE)核酸提取试剂盒 | 32次/盒 、50次/盒 | YS-P013212 |
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
丙型肝炎(HCV) 预分装磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取试剂盒(MB32)
预分装磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取试剂盒(MB96)
预分装磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取试剂盒(MB48)
磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取试剂盒
离心柱法 丙型肝炎(HCV)核酸提取试剂盒
地中海贫血基因 预分装磁珠法 地中海贫血基因提取试剂盒(MB32)
预分装磁珠法 地中海贫血基因提取试剂盒(MB96)
预分装磁珠法 地中海贫血基因提取试剂盒(MB48)
磁珠法 地中海贫血基因提取试剂盒
离心柱法 地中海贫血基因提取试剂盒
结核分歧杆菌 预分装磁珠法 结核分歧杆菌核酸提取试剂盒(MB32)
预分装磁珠法 结核分歧杆菌核酸提取试剂盒(MB96)
预分装磁珠法 结核分歧杆菌核酸提取试剂盒(MB48)
磁珠法 结核分歧杆菌核酸提取试剂盒
离心柱法 结核分歧杆菌核酸提取试剂盒
通用型 预分装磁珠法 通用型基因组DNA提取试剂盒(MB32)
预分装磁珠法 通用型基因组DNA提取试剂盒(MB96)
预分装磁珠法 通用型基因组DNA提取试剂盒(MB48)
磁珠法 通用型基因组DNA提取试剂盒
离心柱法 通用型基因组DNA提取试剂盒
病毒 预分装磁珠法 病毒DNA/RNA提取试剂盒(MB32)
预分装磁珠法 病毒DNA/RNA提取试剂盒(MB96)
预分装磁珠法 病毒DNA/RNA提取试剂盒(MB48)
磁珠法 病毒DNA/RNA提取试剂盒
离心柱法 病毒DNA/RNA提取试剂盒
phospho-ATG7(Ser95) 磷酸化自噬相关蛋白7抗体
phospho-ATG16A(Ser287) 磷酸化自噬相关蛋白16A抗体
phospho-ATG9A(Ser735) 磷酸化自噬相关蛋白9A抗体
phospho-ATG4D(Ser341) 磷酸化自噬相关蛋白4D抗体
phospho-ATG4D(Ser467) 磷酸化自噬相关蛋白4D抗体
phospho-TEM8 (Tyr382) 磷酸化血管内皮标志物8抗体
phospho-ATG4A(Ser100) 磷酸化自噬相关蛋白4A抗体
phospho-ATG4C(Ser166) 磷酸化自噬相关蛋白4C抗体
phospho-ATG16A(Ser213) 磷酸化自噬相关蛋白16A抗体
phospho-AKT3 (Ser472) 磷酸化蛋白激酶AKT3抗体
phospho-ADRB2 (Ser261) 磷酸化肾上腺素能受体β2抗体
phospho-AQP2(Ser261) 磷酸化水通道蛋白2抗体
phospho-ATG3 (Tyr18) 磷酸化自噬相关蛋白3抗体
ALDOB 醛缩酶2抗体
AMY2A 胰腺α淀粉酶抗体
ANKRD11 锚蛋白重复结构域蛋白11抗体
phospho-c-ABL1+2 (Tyr393+429) 磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体
phospho-ATF2 (Thr53) 磷酸化活化复制因子2抗体
AKR1D1 醛固酮还原酶家族1成员D1抗体
ARP4 肝血管生成素相关蛋白抗体
ABHD5 自水解酶结构域5蛋白抗体
ACOT8 酰基辅酶A硫酯酶8
Agpat2 溶血磷脂酸酰基转移酶β抗体
AFP4b AFP4b蛋白抗体
APOC2 载脂蛋白C2抗体
Apolipoprotein A V 载脂蛋白A5抗体
APOA2 载脂蛋白A2抗体
AGPAT4 溶血磷脂酸酰基转移酶D抗体
石蜡切片(FFPE)核酸提取试剂盒APOE3 载脂蛋白E3抗体
ABI3 ABI基因家族2抗体
AARE 氧化蛋白质水解酶
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。