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选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
产品名称:猪游离甲状腺素(FT4)elisa试剂盒
英文名称:Pig free thyroxine,FT4 ELISA kit
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
Porcine Histamine, HIS 试剂盒高钙血症恶性因子(1-34)酰胺,人Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine Estradiol, E2 试剂盒高钙血症恶性因子(1-34), 人Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine Estradiol, E2 试剂盒胰岛素样生长因子I(57-70)Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine transforming growth factor β1, TGF-β1 试剂盒胰岛素样生长因子Ⅱ(69-84)Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine transforming growth factor β1, TGF-β1 试剂盒白介素-1β转化酶底物Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine tumor necrosis factor α, TNF-α 试剂盒下钙素Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine tumor necrosis factor α, TNF-α 试剂盒肯普肽Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine adiponectin, ADP 试剂盒运动升压素Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine adiponectin, ADP 试剂盒层粘连蛋白(925-933)Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine apoprotein B100, apo-B100 试剂盒层粘连蛋白(929-933)Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine apoprotein B100, apo-B100 试剂盒层粘连蛋白九肽,酰胺Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine apoprotein A1, apo-A1 试剂盒白细胞焦激肽(4-8);Pheromonotropic五肽Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine apoprotein A1, apo-A1 试剂盒黄体生成激素释放激素(4-10)Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine 3, IGFBP-3 试剂盒淋巴细胞激活五肽Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine 3, IGFBP-3 试剂盒蜂素Porcine/猪试剂盒规格:48T/96T
Porcine insulin-like growth factors 2, IGF-2 试剂盒Metamorphosin APorcine/猪试剂盒规格:48T/96T
猪游离甲状腺素(FT4)elisa试剂盒Pheomelanin褐黑素种属: 毕赤彩虹酵母PichiaPink-4
Cyclic guanosine monophosphate环磷酸鸟苷种属: Streptomyces│albus (Rossi Doria 1891) Waksman and Henrici#白色链霉菌白色变种
cyclic adenosine monophosphate环磷酸腺苷种属: Streptomyces│kurssanovii库氏链霉菌
bradykinin缓激肽种属: Ceratocystis adiposa (E.J. Butler) C. Moreau长喙壳(斜面)
Troponin T肌钙蛋白T种属: Neurospora│sp.脉孢菌属
matrix metalloproteinase 9基质金属蛋白酶9种属: Xanthomonas│pruni (Smith) Dowson樱花叶细菌性穿孔病
tissue inhibitors of metalloproteinase 1基质金属蛋白酶抑制因子1种属: Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.PL22(灰平菇)
calcitonin gene related peptide降钙素基因相关肽种属: Penicillium│notatum特异青霉(点青霉)
Haptoglobin结合珠蛋白种属: Phaeobacter│inhibens抑制暗棕色杆菌
macrophage inflammatory protein 1α巨噬细胞炎性蛋白-1α种属: Isoptericola cucumisIsoptericola cucumis
ovalbumin specific IgE antibody卵清蛋白特异性IgE抗体种属: Escherichia│coli大肠埃希氏菌DH5α/pLuc-MHR
Immunoglobulin E免疫球蛋白E种属: Oceanimonas│baumannii鲍氏大洋单胞菌
Immunoglobulin G免疫球蛋白G种属: Dermacoccus│sp.皮生球菌属菌种
Immunoglobulin M免疫球蛋白M种属: Comamonas│sp.从毛单胞菌
membrane attack complex膜攻击复合物种属: Ganoderma│sp.大灵芝
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。