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选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
产品名称:大鼠泛素连接酶(E3/UBPL)elisa试剂盒
英文名称:Rat E3/ubiquitin-protein ligase,E3/UBPL ELISA Kit
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
瘦素(LEP)(酶联免疫吸附试验法) 98% 微紫青霉 1g
瘦素(LEP)(酶联免疫吸附试验法) 98% 苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 25g
L选择素(SELL)(酶联免疫吸附试验法) 98% 玉蕈、真姬菇 5g
单核细胞趋化蛋白2(MCP2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 里氏木霉 1g
单核细胞趋化蛋白2(MCP2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 黄伞(10号) 1g
单核细胞趋化蛋白2(MCP2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 短波单胞菌属 250mg
单核细胞趋化蛋白2(MCP2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 枯草芽孢杆菌 25g
巨噬细胞来源趋化因子(MDC)(酶联免疫吸附试验法) 98% 酿酒酵母 5g
抗平滑肌抗体(ASMA)(酶联免疫吸附试验法) >95.0%(GC) 紫带拟迷孔菌 100g
组织蛋白酶K(CTSK)(酶联免疫吸附试验法) 97% 黑曲霉 1g
组织蛋白酶K(CTSK)(酶联免疫吸附试验法) 98% 球孢白僵菌 1g
组织蛋白酶K(CTSK)(酶联免疫吸附试验法) 98% 青枯假单胞菌 5g
组织蛋白酶K(CTSK)(酶联免疫吸附试验法) 97% 解脂亚罗酵母 25g
组织蛋白酶K(CTSK)(酶联免疫吸附试验法) 97% 酿酒酵母 5g
组织蛋白酶K(CTSK)(酶联免疫吸附试验法) 98% 地中海中间根瘤菌 25g
胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)(酶联免疫吸附试验法) 98% 霍氏肠杆菌 5g
胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)(酶联免疫吸附试验法) 1M THF溶液 嗜盐动性球菌 25ml
胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)(酶联免疫吸附试验法) 98% 大肠埃希氏杆菌 1g
大鼠泛素连接酶(E3/UBPL)elisa试剂盒COLLAGEN I蛋白表达定量 CVB-IgM(Coxsackievirus B-Immunoglobulin M) 300 ul
细胞COLLAGEN II蛋白表达流式细胞仪 CVB-IgG(Coxsackievirus B-Immunoglobulin G) 100 ul
载玻片细胞COLLAGEN II蛋白表达荧光显微镜 ECHO-IgG(Enteric CytopathicOrphan virus-Immunoglobulin G) 20 ul
冰冻切片组织COLLAGEN II蛋白表达荧光显微镜 ECHO-IgM(Enteric CytopathicOrphan virus-Immunoglobulin M) 100 ul
石蜡切片组织COLLAGEN II蛋白表达荧光显微镜 HDV-IgM(Hepatitis D Virus-Immunoglobulin M) 100 ul
载玻片细胞βCOLLAGEN II蛋白表达NBT显色光学显微镜 TOX-IgM(Toxoplasma-Immunoglobulin M) 20 ul
冰冻切片组织COLLAGEN II蛋白表达NBT显色光学显微镜 TOX-IgG(Toxoplasma-Immunoglobulin G) 100µl
石蜡切片组织COLLAGEN II蛋白表达NBT显色光学显微镜 EV71-IgG(Enterovirus 71-Immunoglobulin G) 100 ul
细胞COLLAGEN II蛋白表达比色法定量 AS-IgG(anti sperm-Immunoglobulin G) 100 ul
细胞COLLAGEN II蛋白表达荧光定量 EM-IgG(Endometrium-Immunoglobulin G) 100 ul
COLLAGEN II蛋白表达西方杂交分析 A16-IgM(Coxsackie virus A16-Immunoglobulin M) 100 ul
COLLAGEN II蛋白免疫共沉淀分析 EV71-IgM(Enterovirus 71-Immunoglobulin M) 100 ul
COLLAGEN II蛋白表达定量 HCG-IgG(chorionic gonadotropin-Immunoglobulin G) 100 ul
脘蛋白基因变异分析 HP-IgG(Helicobcter Pylori-Immunoglobulin G) 20 ul
活体细胞脘蛋白去糖基化 EM-IgG(Endometrium-Immunoglobulin G) 100 ul
体外脘蛋白去糖基化 HCG-IgG(chorionic gonadotropin-Immunoglobulin G) 100 ul
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。