TrxR硫氧还蛋白氧化还原酶可见分光光度法-上海抚生实业有限公司手机版

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产品属性：

产品名称	规格	检测方法	货号
TrxR硫氧还蛋白氧化还原酶可见分光光度法	50管/48样	可见分光光度法	FS-01S63259

商品介绍：

测定意义

TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘氧化还原循环关键酶之一。

测定原理：

TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412 nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

样本前处理步骤：
样本处理前须知

处理任何样本时,都必须注意:

(1) 实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头(2)实验前须检查各种实验器具是否干净,必要时对实验器具进行清洁,避免污染干扰实验结果。

(a)组织样品处理方法:

1、称取5±0.05g组织样品于50ml离心管中,先加入3ml已稀释好的样品提取液震荡2min;再加入10ml乙腈,充分震荡5min,

2、加入2g中性氧化铝;震荡2min ,室温4000r/min以上,离心10min;;

3、取6ml上清液于干净离心管中,加入5ml二氯甲烷震荡3min ,室温4000r/min以上,离心10min;;

4、取下层清澈液体于玻璃管中,加入20ul氧化剂混匀,在56℃条件下氮气或空气流吹至*干燥;

5、加入1ml复溶液,充分溶解干燥残留物。

6、取100ul 上清液与100ul 已稀释好的复溶液充分混合30s,

7、取50ul进行分析。

样本稀释倍数: 1倍

(b)水样品处理方法:

1、取50ul 上清液与450ul 已稀释好的复溶液充分混合30s,

2、取50ul进行分析。

样本稀释倍数:10倍

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实验通用规则:
1、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

2、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

3、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

4、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

5、实验时，要使底物避光保存。

6、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

8、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。

10、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

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