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常用PCR引物100uL保存

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2017-07-18上海市
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上海莼试生物技术有限公司

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产品简介
常用PCR引物100uL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。
详细信息

 

常用PCR引物100uL保存产品及特点:
易错 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的*性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% ±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
常用PCR引物100uL保存变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不*, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, 高变性温度不宜超过 95 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合.
常用PCR引物100uL保存DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68之间。设置特定反应的 适退火温度,可根据引物的(G+C%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 5,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间*结 合,长时间退火没有必要。
常用PCR引物100uL保存使用方法:
1. 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 补水到 30 uL
2.
按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94 3 分钟易错 PCR 94 1 分钟 45 1 分钟 循环 30 次(见注) 72 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
Prostaglandin F2α methyl ester 5 mg     9alpha。,11alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid methyl ester PGF2α methyl ester Prostaglandin F2α methyl ester

Dibutyryl-cGMP sodium salt 50 mg     Dibutyryl Guanosine 3,5-cyclic monophosphate N-1-oxobutyl-cyclic 3,5-hydrogen phosphate 2-butanoate guanosine, monosodium salt

七水流亚铁(1KG     Ferrous Sulfate 7H2O 7782-63-0 99.5%

Metyrapone 1 g     2-

7Z),11Z-Nonacosadiene 5 mg     7Z11Z-nonacosadiene 7Z),11Z-Nonacosadiene

Biotinyl-Ala-Ser-Thr-DL-Asp-Fluoromethylketone Biotinyl-ASTD-Fluoromethylketone     Biotinyl-ASTD-FMK
FFA Assay Enzyme Mixture 1 ea     FFA Assay Enzyme Mixture

*标记*基化组蛋白H3K27多肽     Biotinylated Trimethyl Histone H3K27 Peptide 200 ul

Tamoxifen 5 g     2-[4-[1Z-12-diphenyl-1-buten-1-yl]phenoxy]-NN-dimethyl-ethanamine Tamoxifen

4-fluoro-α-Pyrrolidinopentiophenone hydrochloride 10 mg     4-fluoro-α-2-1-pyrrolidinyl-Valerophenone|4-fluoro-α-PVP 1-4-fluorophenyl-2-1-pyrrolidinyl-1-pentanone, monohydrochloride

Fluorouracil 25 g     5-fluoro-241H3H-pyrimidinedione NSC 19893|Ro 2-9757|U-8953 Fluorouracil

PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt) (5 mg)     DOPI-3,5-P2|Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate C-8, PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dioctanoylphosphatidyl)inositol-3,5-bisphosphate, trisodium salt
Cell-Based Assay Calcein AM 1000X 1 ea     Cell-Based Assay Calcein AM 1000X

R-ketemine xy7nochloride 10 mg     2R-2-2-chloropxenyl-2-metxylamino-cyclohexanone, monoxy7nochloride

Amplite Red HRP底物     Amplite Red HRP Substrate

CAY10581 10 mg     (±)34-dixy7no-3-xy7noxy-22-dimetxyl-4-[pxenylmetxylamino]-2H-naphtho[23-b]pyran-510-dione CAY10581

Palmitoyl N-Isopropylamide 100 mg     N-isopropyl-hexadec* PIA Palmitoyl N-Isopropylamide

N1-4-chloropxenyl-6-metxyl-N5-[3-9H-purin-6-yl-2-pyridinyl]- 15-Isoinoneolinediamine     B-Raf Inhibitor 1
Bufferedglycerol-SodiumChlorideSolution

盐*增菌液(SC) Selenite Cystine Broth 用于沙门氏菌选择性增菌培养(GBSN标准)

月示胨 Proteose peptone 250 培养基原材料,为营养要求高的细菌生长提供营养

Bolton肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌,每培养基中添加070ubationmediaBolton肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌,每培养基中添加0701

BDSMedium
大肠杆菌显色培养基CRM002l大肠杆菌显色培养基用于大肠杆菌的快速检测和计数

L-Trptophan L-* Japan 25g incubation media L-Trptophan L-* Japan 25g

灵芝(红芝,赤芝) 降低糖蜜废水 /

盐胱酸增菌液(SC)20/包用于沙门氏菌选择性增菌培养

*酶制备培养基
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