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ELISA试剂盒实验夹心法检测过程

来源: 上海邦景实业有限公司

2024/5/20 13:32:09 89

   实验开始前,各试剂和样本均应平衡至室温;样本复融后需再次离心,取上清检测;试剂或样本配制时,需充分混匀并尽量避免起泡;标曲和样本建议做复孔检测。

1. 加样:将标准品工作液依次加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔100 μL。待测样品加入到其他孔,每孔100 μL(若样本浓度高于检测范围,需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜,37℃孵育90分钟。提示:加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。

2. 生物su化抗体/抗原:弃去液体,甩干,不用洗涤。每个孔中立即加入生物su化抗体/抗原工作液100 μL,混匀,酶标板加上覆膜, 37℃孵育1小时。

3. 洗涤:甩尽孔内液体,每孔加洗涤液350 μL,浸泡1-2分钟,吸去或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示:此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。

4. HRP酶结合物:每孔加酶结合物工作液100 μL,混匀,加上覆膜,37℃孵育30分钟。

5. 洗涤:弃去孔内液体,洗板5次,方法同步骤3。

6. 底物:每孔加底物溶液(TMB) 90 μL,混匀,加上覆膜,37℃避光孵育15分钟左右。提示:根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间,但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止。

7. 终止:每孔加终止液50 μL,终止反应。提示:终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

8. 读值:立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热,设置好检测程序。

9. 实验完毕后,将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。


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