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临床检验中ABS-ELISA试剂盒应用不多

来源: 上海酶联生物耗材有限公司

2014/4/8 11:40:09 1397
       IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA试剂盒一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体,因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。甲型肝炎病毒(HAV)抗体的检测模式见图2-7。

      类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。

      2.2.7 ABS-ELISA试剂盒法

      ABS为亲和素(avidin)*(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白,分子量60000,每个分子由4个能和*结合的亚基组成。*为小分子化合物,分子量244。用化学方法制成的衍*-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成*标记产物,标记方法颇为简便。*与亲和素的结合具有很强的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个*分子结合,因此如把ABS与ELISA试剂盒法可分为酶标记亲和素-*(LAB)法和桥联亲和素-*(ABC)法两种类型。两者均以*标记的抗体(或抗原)代替原人ELISA试剂盒系统中的酶标抗体(抗原)。在LAB中,固相*先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的*以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点,在ELISA试剂盒应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA试剂盒较普通ELISA试剂盒多用了两种试剂,增加了操作步骤。

      

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