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起订量:

  • 3490
  • ≥1盒
核酸提取及纯化试剂盒

具体成交价以合同协议为准

2022-12-30上海市
型号
参数
品牌:其他品牌 产地:国产 加工定制:是
上海邦景实业有限公司

初级会员8经销商

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elisa试剂盒,ATCC细胞,标准品,培养基
产品简介
RNA和DNA提取:
裂解:裂解公式可能因您要提取 DNA 还是 RNA 而异,但共同点是含有高浓度离液盐的裂解缓冲液。
Chaotropes(离液剂)的作用:Chaotrope会破坏氢键及疏水间的相互作用。离液盐包括盐酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸锂。
洗涤剂:除了离液剂外,裂解缓冲液中通常还有一些去污剂,以帮助蛋白质溶解和裂解。
溶jun酶和蛋白酶K:根据样品类型,也可以使用酶进行裂解。蛋白酶
详细信息

特点优势:

    1.特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到 

    2.   重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为 

    3.   灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。

    4.   实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。

    5.   优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

    6.   优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

提取步骤:

1.从负八十冰箱取出样品,放置于冰上缓慢解冻; (提前预冷离心机至4度)

2.待解冻后(红色),加入200 μl氯仿(加入氯仿体积为Trizol体积的1/5),剧烈震荡(乳白红色),冰上静置10 min。 (氯仿为有机溶剂,有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和RNA脱离,RNA进入水相。)

3.放置于预冷离心机,离心(4度,12000 rpm,15 min),离心后可见明显分三层(上层无色透明水相为RNA层,中间很薄的乳白色为DNA层,下层为红色为蛋白层)。

4.小心缓慢吸取上清,约400 μl(宁可少吸,也不要多吸取),置于另一个新的1.5 ml RNase-free EP管中,加入等体积的异丙醇,上下颠倒混匀,常温静置放置15 min。

5.离心(4度,12000 rpm,15 min),可见白色沉淀(有时细胞较少看不到沉淀,可放置负二十或负八十两小时再继续后面步骤)

6.弃上清,每管加入950 ul 75% 乙醇,上下颠倒混匀(切记不要用枪吹打混匀,这样会造成RNA溶解)。

7.离心(4度,12000 rpm,10 min),可见底部明显白色沉淀。

8.离心后,弃掉上清,放入离心机再次瞬离,用10 μl 的移液器洗去残留液体, 开盖晾干(约5 min)。

9.每个样品根据沉淀大小加入适量DEPC水(一般20~30 μl,有时看不到沉淀,可加10 μl DEPC水溶解),吹打溶解RNA,十一楼酶标仪测浓度,OD值(260/280=1.8-2.0)标记,负八十保存。

备注:对于中性粒细胞提取RNA建议细胞数目大于2x106/样品;

备注:操作过程中佩戴口罩。

PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是 末及倒数 个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列 有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

注意事项: 

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

3.请每次测定的同时做标准曲线做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8.本试剂不同批号组分不得混用。

9.不能使用过期产品。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 

 

 


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产品参数

品牌 其他品牌
产地 国产
加工定制
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