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我公司提供原代细胞、细胞系、细胞株和菌种,细胞库管理规范,提供的细胞株背景清楚,提供参考文献和*培养条件。纯度可达 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 规格 | 货号 |
人前列腺上皮细胞提取物直销 | T25m2 | CS-963981 |
人前列腺上皮细胞提取物【Human Prostate : Normal Prostate Epithelial Cell Derivatives】人前列腺上皮细胞提取物是从人前列腺上皮细胞提取的,人前列腺上皮细胞从正常人前列腺组织制备。正常人前列腺组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞处理方法:
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导,请及时电话或邮件联系。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2 培养1168-87-2 Z-Ala-ONp 100g Acinetobacter lwoffi鲁氏不动杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
1168-87-2 Z-Ala-ONp 25g Histoplasma capsulatum var. farciminosum荚膜组织胞浆菌马皮疽变种探针法荧光定量PCR试剂盒
116939-85-6 Boc-Met-Pro-OH 1g Acinetobacter lwoffi鲁氏不动杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
116939-85-6 Boc-Met-Pro-OH 5g Lymphocytic Choriomeningitis Virus(LCMV)淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
1169483-24-2 AMG 853 10mg Lymphocytic Choriomeningitis Virus(LCMV)淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
CD70 Others Human CD70 / CD27L / TNFSF7 细胞裂解液 (阳性对照) 百蕊草素I;山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷(标准品)Kaempferol-3-O-glucorhamnoside质量规格:HPLC≥98%,标准品
肝永生化细胞;THLE-3宝藿苷I,羊藿苷II(标准品)Baohuoside I质量规格:HPLC≥98%,标准品
大鼠脑膜细胞(RMC)(5×105)贝母素甲(标准品)Peimine质量规格:HPLC≥99%,标准品
CM-H048胃粘膜上皮细胞*培养基100mL贝母素乙(标准品)Peiminine质量规格:HPLC≥99%,标准品
小鼠神经母细胞瘤细胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] 小鼠卵巢颗粒细胞*培养基 100mL贝母辛(标准品)Peimisine质量规格:HPLC≥98%,标准品
人前列腺上皮细胞提取物直销兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBF 癌细胞,MCF7细胞 Cl.Ly1+2-/9细胞,小鼠T细胞吡非尼酮,哌非尼酮质量规格:>98.5%,BR,可用于细胞培养Pirfenidone
脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C吡非尼酮,哌非尼酮(标准品)质量规格:HPLC>99%,标准品Pirfenidone
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 细胞裂解液 (阳性对照) 胞1胆碱钠;5-胞苷二1酸单钠盐质量规格:>98%,BRCiticoline
CL-0460U14-GFP(小鼠子细胞)5×106cells/瓶×2硬脂酸红霉素质量规格:USPErythromycin stearate
AACS Others Human AACS / Acetoacetyl-CoA 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 精胺质量规格:>98%,BRSpermine
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM,常温条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,吹打均匀后,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。