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收到冻存细胞的处理方法:
1.37°C水浴预热培养基;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;
5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
大鼠脑膜成纤维细胞【Rat Brain: Normal Brain Meningeal Fibroblasts】产品描述:提供的原代细胞均来自新鲜组织,用于培养该细胞的组织采集是根据国际标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞的污染,同时保证质量的稳定。在生物技术部标准的操作流程下,原代细胞可以保持分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
发货:客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。提供的细胞有标准的鉴定流程,保证细胞的纯度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基;2、说明书及注意事项;3、售后服务标准。
保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
产品名称 | 大鼠脑膜成纤维细胞直销 |
规格 | T25m2 |
货号 | CS-963917 |
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项:
1.接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色
,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
基质金属蛋白酶(MMP)羧转铁蛋白(CMansferrin-zymography电泳分析试剂盒(MMP7)5 硬脂酸锂(>98%,BR) Lithium stearate 质量规格:>98%,BR
基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA检测试剂盒Monkeymaixmetalloproteinase11,MMP11 96T/48T 硫酸锂一水(分子生物学级) Lithium sulfate monohydrate 质量规格:>98%,分子生物学级
基质金属蛋白酶3抑制剂(NNGH)500微升 L-苏糖酸钙(>99%,BR) L-Threonic acid calcium salt 质量规格:>99%,BR
基质金属蛋白酶3抑制剂(NNGH)500微升 L-酪氨酸二钠盐(>98%,BC) L-Tyrosine di salt hydrate 质量规格:>98%,BC
基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP1/2/3)逆相明胶酶谱法(reversegelatin-zymography)电泳分析试剂盒(不含标准样)5 鲁米诺钠(>98%,BS) Luminol, salt 质量规格:>98%,BS
激肽释放酶(KALLIKREIN)活性比色法定量检测试剂盒20 -6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR) Magenta-Gal 质量规格:>98%,BR
技术平台操作20样本 -6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR) Magenta-Gal 质量规格:>98%,BR
寄生虫总RNA分离试剂盒20 柠檬酸镁九水(>98%,BR) Magnesium nonahydrate 质量规格:>98%,BR
甲RNA电泳上样缓冲液(RNA酶保护)10毫升 十二烷基硫酸镁(分子生物学) Magnesium dodecyl sulfate 质量规格:>85%,分子生物学级
甲变性RNA垂直电泳全套试剂盒10 氟化镁(>98%,BR) Magnesium fluoride 质量规格:>98%,BR
小鼠葡萄糖60酸脱氢酶(G6PD)ELISA试剂盒 ,英文名: G6PD ELISA Kit 去离子甲酰胺 Formamide deionized 质量规格:>99%,分子生物学级
小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA检测试剂盒MouseLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 96T/48T 石蜡油 Paraffin oil, light fraction 质量规格:分子生物学级,PCR Grade
人分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)试剂盒 Human SFRP2 ELISA Kit 乙酸钾 Potassium acetate 质量规格:>99%,分子生物学级
Ratkeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit大鼠角化细胞因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒规格:96T/48T 无水乙酸钠 acetate, anhydrate 质量规格:>99%,分子生物学级
CDKN2A基因化程度定量分析试剂盒20 低熔点琼脂糖;具有低凝胶温度的琼脂糖 Agarose, low gelling temperature 质量规格:BR;具有低凝胶温度
MouseMotilin,MTLELISA试剂盒小鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒规格:96T/48T 无水二氢钾 Potassium phosphate, monobasic, anhydrous 质量规格:>99%,分子生物学级
小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA试剂盒 ,英文名: ODF ELISA Kit 6-苄氨基嘌呤 6-Benzylamino purine 质量规格:>99%
小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA检测试剂盒MouseIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T 水(HPLC grade) Water 质量规格:HPLC grade
人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)试剂盒 Human SFRP1 ELISA Kit 马来酸,顺丁烯二酸 Maleic acid 质量规格:AR,HPLC>99%
RatKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit大鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T 硫酸铵 Ammonium sulfate 质量规格:>99%,分子生物学级
大鼠脑膜成纤维细胞直销大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 Rat ansforming Growth Factor β1,TGF-β1 ELISA kit 硫酸镁无水(分子生物学级) Magnesium sulfate anhydrous 质量规格:>99%,分子生物学级
大鼠转化生长因子β1受体(TGF-β1R)试剂盒 Rat ansforming Growth factor β1 receptor,TGF-β1R ELISA kit 硫酸镁七水(分子生物学级) Magnesium sulfate, heptahydrate 质量规格:>98%,分子生物
大鼠转化生长因子β2(TGF-β2)试剂盒 Rat ansforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA kit 硫酸铝十六水(>98%,BR) Aluminum sulfate, hexadecahydrate 质量规格:>98%,BR
大鼠转化生长因子β2受体(TGF-β2R)试剂盒 Rat ansforming growth factor β2 receptor,TGF-β2R ELISA Kit 硫酸铝钾十二水(>99%,BR) Aluminum potassium sulfate docecahydrate 质量规格:>99%,BR
大鼠转化生长因子β3(TGF-β3)试剂盒 Rat ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA Kit 硫酸链霉素灭菌溶液,30 mg/ml Streptomycin sulfate solution, 30 mg/ml 质量规格:Sterile灭菌溶液,30mg/ml
大鼠转化生长因子β刺激蛋白22(TSC22)试剂盒 Rat ansforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA Kit 硫酸链霉素(标准品) Streptomycin Sulphate 质量规格:效价测定
大鼠转甲状腺素蛋白(T)试剂盒 Rat ansthyretin,T ELISA Kit 硫酸链霉素 Streptomycin Sulphate 质量规格:>720IU/MG,BR
大鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA检测试剂盒Ratansferrieceptor,TFRELISAKit 96T/48T 硫酸联氨(AR) Hydrazine sulfate 质量规格:>99%,AR
大鼠转移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)试剂盒 Rat Kisspeptin 1,KISS1 ELISA Kit 硫酸锂一水(分子生物学级) Lithium sulfate monohydrate 质量规格:>98%,分子生物学级
大鼠组胺(HIS)ELISA检测试剂盒RatHistamine,HISELISAKit 96T/48T 硫酸锂(>98%,BR) Lithium sulfate 质量规格:>98%,BR