实验操作步骤： 
a．采用认可的方案处死人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞啮齿动物。   
b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。 
c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。   
d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。   
e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。

公司向您推荐大鼠胎儿真皮成纤维细胞的详细说明：

产品描述：提供的原代细胞均来自新鲜组织，提供的人源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。科技提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基；2、说明书及注意事项；3、科技售后服务标准。

      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。
细胞株的培养和传代培养：
用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养对细胞因子有依赖性的细胞株时还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，根据细胞生长特性，在适当的时候进行传代，一般3～4 天传代一次。
悬浮生长细胞的传代：
直接离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液稀释悬浮细胞，一般按1：2-1：5 稀释细胞后，分瓶继续培养。
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实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；

伊红Y钠L-组氨酸 99%氨基硫脲pUNO1-hSIGIRR

牛肉浸粉L-组氨酸 EP, USP ，非动物源,用于细胞培养3-（2-氨基）吲哚pUNO1-hSIGLEC5

牛肉浸粉L-组氨酸 99.5%胰蛋白酶（猪胰）pUNO1-hSIKEb

牛肉浸粉L-赖氨酸盐酸盐 99%胰蛋白酶（牛胰）pUNO1-hSIRPB1a

盐酸胍L-硫氨酸 99%台盼蓝pUNO1-hSIRPGa

盐酸胍S-基-L-半胱氨酸 98%间苯二酚磺pUNO1-hSIRT1

盐酸胍L-鸟氨酸盐酸盐 98%转移核糖核酸（酵母）pUNO1-hSLAMF1

D-甘露醇L-酪氨酸 99%三树脂pUNO1-hSLAMF2a

D-甘露醇6-氨基-1-己醇  97%曲拉通x-405pUNO1-hSLAMF3a

D-甘露醇3,4-二溴噻吩 97%曲拉通x-200pUNO1-hSLAMF4a

大鼠胎儿真皮成纤维细胞三氟烷铜(Ⅱ) 98%4-Hydroxyphenylacetic acid；对羟基苯酸水溶性硅油Rat INSR-β(Insulin Receptor Beta Subunit) ELISA Kit

Rat I-PTH(Intact PaRathormone) ELISA Kit

二环己基膦 97%Ibuprofen；布洛芬碱性蛋白酶Rat ITLN1(Inectin 1/Omentin) ELISA Kit

Rat JNK(C-Jun N-Terminal Kinases) ELISA Kit

1,4,7,10-四氮杂环十二烷 97%Diclofenac sodium；双芬酸钠椰子油二醇酰胺（6501）Rat LCAT(Lecithin-Cholesterol Acyltransferase) ELISA Kit

Rat LEPR(Leptin Receptor) ELISA Kit

二环己基膦  98%Berberrubine；小檗红碱脂肪酸酯氧基化物Rat LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit

Rat LIFR(Leukemia Inhibitory Factor Receptor) ELISA Kit

三氟烷亚铜苯络合物（2:1） 99.9%Cisplatin；顺铂咪唑啉Rat LOX-1(Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1) ELISA Kit

Rat Lp-a(Lipoprotein a) ELISA Kit

三氟烷亚铜苯络合物（2:1） 98%Sodium cromoglycate；色苷酸钠亿菌优Rat LPO(Lipid Peroxide) ELISA Kit

Rat Lptn(Lymphotactin) ELISA Kit

三氟烷亚铜(I)苯联合体 (2:1) 90%Sambutoxin长效增氧片Rat LTF(Lactoferrin) ELISA Kit

Rat MAPK(P38 Mitogen-Activated Protein Kinase) ELISA Kit

[1,3-双(2,6-二异)咪唑-2-亚基]铜(I) 98%Chlorohemin；血红素氧化铝Rat MAPτ(Microtubule Associated Protein Tau) ELISA Kit

Rat MBP/MBL(Mannma Binding Protein/Mannan Binding Lectin) ELISA Kit

铜（I）噻吩- 2 -羧酸 95%Neoagarotetraose；新琼四糖氧化铁橙Rat M-CSF(Macrophage Colony-Stimulating Factor) ELISA Kit

Rat MDC/CCL22(Macrophage-Derived Chemokine) ELISA Kit

双(六氟基酮)合铜(II)，水合 95%Amentoflavone；穗花杉双黄酮氧化铁蓝Rat MDH1(Malate Dehydrogenase 1) ELISA Kit

Rat Methylase(Methylase) ELISA Kit

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。