材料与方法

感受态 ＢＬ２１，天根生化科技有限公司产品；ＩＰＴＧ，北京索莱宝科技有限公司产品；Ｎｉ－ＮＴＡ 琼脂糖交联树脂，碧云天生物技术有限公司产品；弗氏佐剂、ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ、Ｉｍｉｄａｚｏｌｅ，北京索莱宝科技有限公司产品。超声波破碎仪（ＪＹ９２－Ⅱ）、高速分散均质机（Ｓ１０），宁 波 新 芝 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司产品；涡旋 混 合 器（ＱＬ－９０１），海门市其林贝尔仪器制造有限公司产品；分光光度计（ＮａｎｏＤｒｏｐ－１０００），Ｌｉｍｉｔｅｄ基因有限公司产品。

结果

用 特 异 性 引 物 ＵＢＣＨ６－Ｆ 和 ＵＢＣＨ６－Ｒ 通 过ＰＣＲ方法扩增 ＵＢＣＨ６基因５８２ｂｐ的片段。胶回收目的片段后，与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接，转化摇 菌，菌 液 ＰＣＲ 鉴定结果为阳性的抽提质粒，菌液ＰＣＲ结果。将阳性质粒送测序验证后，证明目的片段成功与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接。分 别 用 ＢａｍＨⅠ／ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅠ／ＮｏｔⅠ 对重组原核表达载体ｐＧＥＸ－ＵＢＣＨ６和重组真核表达载体ｐｃＤＮＡ－ＵＢＣＨ６进行双酶切鉴定。同时将重组原核与真核表达载体送测序验证，结果表明重组表达载体连接成功。