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英文名称：WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格：100次|500次
货号：FS-X9529
产品介绍:
本试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。 WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-1产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(参考下图)。 本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。 本试剂盒检测非常便捷。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。WST-1对细胞无明显毒性。加入WST-1显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到佳测定时间。 注意事项： 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 |
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
肝素酶2(HPA2)检测试剂盒 forHeparanase2(HPA2)
磷酸烯醇式酸羧激酶1(PCK1)检测试剂盒 forPhosphoenolpyruvateCarboxykinase1,Soluble(PCK1)
干扰素γ(IFNγ)检测试剂盒 forInterferonGamma(IFNg)
多巴胺转运蛋白(DAT)检测试剂盒 forDopamineTransporter(DAT)
中间α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)检测试剂盒 forInterAlpha-GlobulinInhibitorH5(ITIH5)
岩藻糖基转移酶3(FUT3)检测试剂盒 forFucosyltransferase3(FUT3)
血红蛋白(HB)检测试剂盒 forHemoglobin(HB)
铜伴侣超氧化物歧化酶(SOD4)检测试剂盒 forSuperoxideDismutase,CopperChaperone(SOD4)
B-细胞淋巴瘤因子10(Bcl10)检测试剂盒 forB-CellCLL/Lymphoma10(Bcl10)
5-羟色胺受体1A(HTR1A)检测试剂盒 for5-HydroxytryptamineReceptor1A(HTR1A)
葡萄糖苷酸酶β(GUSβ)检测试剂盒 forGlucuronidaseBeta(GUSb)
膜联蛋白A4(ANXA4)检测试剂盒 forAnnexinA4(ANXA4)
酸脱氢酶β(PDHβ)检测试剂盒 forPyruvateDehydrogenaseBeta(PDHb)
Codanin1蛋白(CDAN1)检测试剂盒 forCodanin1(CDAN1)
Cornulin蛋白(CRNN)检测试剂盒 forCornulin(CRNN)
纤维蛋白原α(FGα)检测试剂盒 forFibrinogenAlpha(FGa)
FMS样氨酸激酶3(Flt3)检测试剂盒 forFMSLikeTyrosineKinase3(Flt3)
细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1法)氨苯丁酯标准品 规格:200mg 英文名称：Butamben
羟苯丙酯标准品 规格:200mg 英文名称：Propylparaben
伐他汀钠标准品 规格:350mg 英文名称：Fluvastatin Sodium
拉西泮相关物质C标准品 规格:25mg 英文名称：Lorazepam Related Compound C
丙沙星甲酰胺标准品 规格:125mg 英文名称：Ciprofloxacin Formamide
美脲标准品 规格:200mg 英文名称：Glimepiride
胺太林相关物质A标准品 规格:50mg 英文名称：
万拉法新相关物质A标准品 规格:10mg 英文名称：
愈创酚甘油醚标准品 规格:200mg 英文名称：Guaifenesin
诺沙星标准品 规格:200mg 英文名称：Enrofloxacin
