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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：高保真KOD试剂盒
英文名称：
产品规格：50U/200U/1000U
货号：FS-X9729
产品介绍:
KOD DNA polymerase 是从克隆有α –型高保真DNA聚合酶的大肠杆菌中分离纯化所得，具有3`→5`核酸外切酶活性，保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。具有较高的延伸速率，在推荐的条件下大于每分钟2kb，PCR产物为平端，可与直接接入本公司Blunt平端连接载体中。用于高保真、快速扩增目标DNA，环拉法引入点突变，补平DNA粘性末端等。 经酶切实验检测无外源核酸酶污染，PCR方法未检测到宿主DNA残留，能够有效扩增大肠杆菌基因组DNA。 酶活定义： 在推荐的缓冲反应体系中，以大马哈鱼精DNA为模板，68℃、30min内合成10nmol核酸所需要的酶量为一个活性单位。 保存条件： 储存溶液为：50mM Tris-HCl（pH7.6），50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50%(V/V) glycerol，－20℃存放一年，无明显活性丧失。冰袋运输 。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
γ干扰受体(IFN-γR)英文名：IFN-γR 芳基硫酯A抗体包装1g
γ干扰(IFN-γ)英文名：IFN-γ 拟南芥ACA11抗体包装1g
γ干扰(IFNγ)英文名：IFNγ AHA3抗体（拟南芥）包装250mg
γ分泌(GACE)英文名：GACE 磷化钠ATP蛋白a1抗体包装5g
γ-基丁(GABA)英文名：GABA 磷化凋亡信号调节激1抗体包装50MG
γ基丁(GABA)英文名：GABA 中性胆固酯解1抗体包装1g
β抑制蛋白2(ARRB2)英文名：ARRB2 人星形胶质抗体包装5g
β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)英文名：β-TG 缩A抗体包装100g
β细胞(BTC)英文名：BTC 膜粘连蛋白6抗体包装25g
β位淀粉样前体蛋白裂解1(BACE1)英文名：BACE1 β淀粉样肽（25-35）抗体包装500g
β葡萄糖醛苷(βGD)英文名：βGD 血管紧张I抗体包装1g
β葡糖苷(β-glucosidase)英文名：β-glucosidase 肾上腺髓质抗体(N端20肽)包装250mg
β内酰胺抑制剂(BLI)英文名：BLI ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体包装5g
β内啡肽受体(β-EPR)英文名：β-EPR 精加压受体2抗体包装25g
β内啡肽(β-EP)英文名：β-EP 凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体包装5g
磷化蛋白激B抗体基质金属蛋白10(MMP10)RG108 (N-Phthalyl-L-tryptophan) 是一种非核苷的 DNA 基转移 (DNMTs) 抑制剂 (IC50=115 nM)，RG10
高保真KOD试剂盒Pontibacter 2-溴苄抗上皮生长抑制因子
铜绿假单胞 3-氨基-N-甲基苄抗神抗体
酿酒酵母 2-溴-5-羟基苯抗神经元核抗体1型;抗Hu抗体
拟革盖 3-乙抗肾小球基底膜抗体
球孢白僵 3-氟--5-甲抗双链DNA抗体;天然DNA抗体
灵芝 2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊环抗体球蛋白A
高大毛壳 5-氟-2-甲氧基苯抗天然脱氧核糖核酸抗体
佛雷德里克斯堡假单胞 二苯基乙酰抗纤维蛋白抗体
大肠埃希 3-甲氧基甲酯抗小核糖核蛋白;Sm抗体
金针菇（毛柄、冬菇） 4,7-二满二酮抗心磷脂IgA抗体
灵芝 链脲抗心磷脂IgG抗体
大肠埃希氏 2--4-三氟甲基-嘧啶-甲酸乙酯抗心磷脂IgM抗体
巨大芽孢杆 乙酰酮铕(III)水合物抗信号识别颗粒抗体
韩芝 3-溴-5-抗胸腺球蛋白
植物乳杆 2-甲基-3-硝基吡啶抗血小板IgA抗体
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
