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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：PKH67细胞增殖与毒性检测试剂盒
英文名称：
产品规格：500T
货号：FS-X9716
产品介绍:
荧光染料PKH67 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。对细胞毒性较小，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，有着强而稳定的绿色荧光。经PKH67标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。 在细胞分裂增殖过程中，PKH67的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH67标记细胞的荧光非常均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，PKH67标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2的荧光强度)，二次(1/4的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。PKH67可检测分裂次数多达六次甚至更多。 除了用于细胞增殖检测，PKH67 还可以用于细胞的体外盒体内示踪，标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注入体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。 PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。 PKH67标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。 PKH67标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=490 nm,λem=502 nm。 储存条件：-20℃避光保存。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
肝脏型脂肪结合蛋白(L-FABP)英文名：L-FABP ADP核糖基化因子结合蛋白抗体包装25g
肝细胞生长因子激活物(HGFAC)英文名：HGFAC ADP核糖基化因子GTP激活蛋白1抗体包装5g
肝细胞生长因子(HGF)英文名：HGF ADP核糖基化因子相关蛋白1包装250mg
甘油三酯(TG)英文名：TG 琥珀裂解抗体包装50MG
甘油醛-3-磷脱氢(GAPDH/G3PDH)英文名：GAPDH/G3PDH 精酰tRNA合成抗体包装25g
甘露糖结合凝集(MBL)英文名：MBL 真核翻译起始因子2C3抗体包装5g
钙卫蛋白(CALP)英文名：CALP 真核翻译起始因子2C4抗体包装1g
钙通道阻滞剂(CCB)英文名：CCB Rho GTP激活蛋白15抗体包装5g
钙调(CAM)英文名：CAM 抑癌基因结合蛋白ARID1B抗体包装1g
钙结合蛋白(CR)英文名：CR E3连接蛋白ARIH2抗体包装25g
钙非依赖型磷脂A2(iPLA2)英文名：iPLA2 ADP核糖基化样因子1抗体包装5g
分泌型免疫球蛋白A(sIgA)英文名：sIgA ADP核糖基化因子样蛋白4抗体包装1g
分泌型磷脂A2(sPLA2)英文名：sPLA2 肌动蛋白相关蛋白2/3抗体包装5g
肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)英文名：PARC/CCL18 肌动蛋白相关蛋白2/3亚型2抗体包装1g
肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)英文名：SP-C 肌动蛋白相关蛋白2/3亚型4抗体包装10MG
载脂蛋白1抗体转铁蛋白(TRF)Nilotinib (AMN-107) is a Bcr-Abl inhibitor with IC50 less than 30 nM in Murine m
PKH67细胞增殖与毒性检测试剂盒吉氏芽孢杆 硫化镍(II) (metals basis)核因子κB抑制蛋白α
谢瓦散囊 3,4-嘧啶乙二酸二乙酯黑皮质
耐辐射奇球 1-乙基-1,2,4-三唑黑色瘤分化相关基因5
瘤突曲霉 1-苄氧羰基-4-甲酰黑色瘤相关抗原1
球孢白僵 N-苄氧羰基-L-丝甲酯黑色
纺锤雷链霉 4--2-甲氧基黑色抗体
香菇 2-甲氧基苯基溴化镁痕量关联受体6
宛氏拟青霉 N-Boc-2-甲酸甲酯横纹肌辅肌动蛋白α
抗生链霉 3-苯酰肼红转酮
苏云金芽孢杆 (4-甲氧基吡啶-2-基)甲呼吸道合胞病抗原
林生毛霉 4,6-二烟胡萝卜
产氨短杆 N-苯基乙二花生四烯酸
伯克霍尔德氏 3-基肉桂酸环孢A
坚强芽孢杆 3-甲硫基乙酸酯环磷酸鸟苷
枯草芽孢杆 N-苄氧羰基-L-苏氨苄酯环
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
