操作流程：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品属性：  

商品介绍：

测定意义:

PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。

测定原理：

PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。

需自备的仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用

样品制备：

1）. 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品，体积可达2.000ml。

2）. 过滤混浊溶液。

3）. 除去样品中的CO 2 （果糖含量测试盒说明书过过滤）。

4 ）. 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。

5 ）. 调整酸性浅色样品的PH值至8.0，孵育约15分钟。

6 ）. 用空白样品做对照测定有色样品（如有必要调整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。

8 ）. 压碎、搅匀固体或半固体样品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。

10）.含脂肪的样品用热水提取。

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