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使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司产品具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称:VG染色液价格
货号:BJ-01R3606
规格:100ml
分类:结缔染色
储存条件:室温,避光,12个月
用途:胶原纤维染色,简称V.G染色液
注意事项:临用时饱和PA溶液:酸性复红=9:1混合后使用。
注意事项:
1、尽注意无菌操作,避免污染。
2、避免反复冻融。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
标准溶液的配制:
1.直接配制法 对于纯净的物质(称做基准物质)可准确进行称量,用蒸馏水溶解后,转移到一定容积的容量瓶中稀释至标线,溶液的准确浓度可以直接计算出来。溶质的纯度、性质等对浓度有较大影响,为此,对用来直接配制标准溶液用的基准物质必须具备以下条件:
(1)物质的纯度要高,含量不得低于99.9%,杂质的含量应当少到可以忽略的程度。
(2)物质的分子组成应与其化学式*符合,包括结水合物中的结品水含量也必须与其化学式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。
(3)性质稳定,贮蔵时应不发生变化,不易吸收空气中的水分、二氧化碳等气体而改变其成分,不易风化潮解和被空气氧化,烘干时不易分解等。此外最好使用分子量较大的基准物质以减小称量误差。
2.间接配制法 凡不符合基准物质条件的物质,可先配制成近似所需浓度的溶液,再用基准物质溶液或能与其发生定量反应的标准溶液进行滴定,求其准确浓度,这种通过滴定来确定准确浓度的操作叫做“标定”。间接法配制近似浓度溶液时不需用分析天平称量和容量瓶配制,可用台秤、量筒等器皿。将称好的物质转移到干净的试剂瓶中,先加少量蒸馏水将其溶解,继续用量筒加蒸馏水至需要量即可。由于大多数试剂不符合基准物的条件,故间接法配制标准溶液是经常的。如固体NaOH因易吸收空气中的水分而潮解和吸收CO2使表面变质;浓盐酸因易挥发而无法准确称量;不易得到分析纯级的试剂等,这些物质的标准溶液须用间接法来配制,经标定后再做标准溶液使用。
标准溶液的标定:
1.用基准物质标定法
(1)多次称量法 用减重法精密称取几份(如2~3份)基准物质,分别倒入编号的干净锥形瓶(或烧杯)内,各加少量蒸馏水溶解,再加指示剂后分别用待标定溶液滴定至等当点,各自记录所消耗待标定溶液的体积,结合基准物质的重量分别算出溶液的准确浓度,最后取平均值做为标准溶液的浓度。
(2)移液管法 精密称取一份基准物质,在干净的小烧杯内加少量蒸馏水溶解,顺玻棒全部转移到已校正好的容量瓶中,多次冲洗烧杯洗液并入容量瓶中,最后配成一定体积的溶液,混匀。每次滴定用配套的移液管吸取并转移至锥形瓶中,加指示剂后用待标定溶液滴定至等当点,每次做好记录,根据所消耗待标定溶液的体积,结合基准物质的重量,分别算出溶液的准确浓度取平均值做为标准溶液的浓度。
2.比较法标定 如果待标定溶液能与某标准溶液进行反应,可吸量一定体积的某标准溶液,用待标定溶液滴定,或吸量一定体积的待标定溶液,用某标准溶液滴定。根据两溶液所消耗的毫升数及某标准溶液的浓度,按N1V1=N2V2式可以计算出待标定溶液的准确浓度。这种用标准落液来测定待标定溶液准确浓度的过程称为“比较法”标定。如果某标准溶液的浓度由于某些原因不够准确时,就会直接影响待标定溶液浓度的准确性,显然比较法不如用基准物质直接标定的方法精确,但比较法简便易行。
标定完毕,盖紧标准溶液试剂瓶塞,瓶签上注明标准溶液名称、准确浓度和日期等。
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Radix cyathulae川牛膝染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Desmocollin 4 桥粒糖蛋白4抗体 规格: 0.2ml
Bifidobacterium spp.双歧杆属通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-Rictor (Thr1135) 磷酸化雷帕霉素靶蛋白复合体2抗体 规格: 0.1ml
Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)高致病性猪生殖与呼吸综合症病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周MASP2 甘露聚糖结合凝集素丝肽2抗体 规格: 0.1ml
Herba taraxaci蒲公英探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周PDZD9 PDZ结构域PDZK9蛋白抗体 规格: 0.2ml
Enterinvasive E.coli(EIEC)肠侵袭性大肠杆(大肠埃希氏)LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Plasminogen 纤维蛋白溶原抗体 规格: 0.1ml
Coxiella burnetii 伯氏立克次氏体(柯克斯体)探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HIFPH4 缺氧诱导因子脯氨酰4羟化抗体 规格: 0.2ml
Bacillus megaterium巨大芽孢杆染料法qPCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 1-3天CaMK2 beta/CaMK2 gamma 钙/钙调素依赖蛋白激2b/2γ抗体 规格: 0.1ml
鹿源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周C15orf52 15号染色体开放阅读框52抗体 规格: 0.2ml
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